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目的:研究Tim-3/Galectin-9信号通路及相关分子在泡球蚴持续性感染中的变化特点,探讨其在泡球蚴感染中的免疫调节作用。方法:将6~8周龄BALB/c小鼠随机分为感染组和对照组,感染组小鼠经腹腔接种原头蚴悬液,对照组小鼠相同部位注射等量生理盐水,感染2d、8d、30d、60d、90d、180d和270d时采集标本。(1)小鼠肝脏组织用HE染色法观察其病理变化;(2)免疫组织化学方法观察Tim-3和Galectin-9分子在肝脏中的表达情况;(3)实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)法检测Tim-3和Galectin-9及相关因子IL-12、IFN-γ和IL-4的mRNA表达;(4)流式细胞术检测小鼠脾Tim-3+T细胞和CBA检测血清中IL-12、IFN-γ和IL-4的水平;(5)体外实验研究Galectin-9对小鼠脾T淋巴细胞的凋亡及相关因子的影响;(6)ELISA法检测泡球蚴病患者(AE患者)和健康对照者血清sTim-3和Galectin-9的水平及细胞因子IL-12、IFN-γ和IL-4的水平。结果:(1)泡球蚴感染2d、8d,小鼠肝组织无明显病理改变,30d肝脏内出现炎性细胞浸润,60-90d可见肝组织坏死,泡球蚴纤维囊壁形成,180-270d肝组织结构改变,出现大量泡球蚴纤维囊壁甚至原头蚴;(2)免疫组织化学显示Tim-3和Galectin-9在泡球蚴感染2d、8d时,与对照组无差异,30d在肝窦出现阳性表达,60d-90d时在汇管区及炎性细胞浸润区域大量表达,180-270d可见泡球蚴纤维囊壁的病灶周围表达增高;(3)Tim-3 mRNA、Galectin-9 mRNA表达在感染2d、8d时与对照组相比无差异,30d开始表达量逐渐增高,90d达高峰,180d-270d略有下降;IFN-γmRNA和IL-12 mRNA在感染2d、8d时即明显升高,30d-60d稍有下降,90d-270d明显下降,但仍高于对照组;而IL-4mRNA的表达则随着泡球蚴感染时间的延长而逐渐升高;(4)泡球蚴感染小鼠CD4~+Tim-3~+T细胞/CD4~+T细胞水平无明显改变,30d开始升高,90d达峰值180d至270d略有下降,但仍明显高于对照组。血清IFN-γ和IL-12浓度在感染2d和8d即达峰值,30d逐渐下降;IL-4浓度则从2d和8d随感染延长缓慢增高;(5)体外实验显示加Galectin-9时,T淋巴细胞凋亡增加,IL-12、IFN-γ水平降低,而IL-4水平升高;(6)AE患者血清sTim-3和Galectin-9水平均显著高于健康对照者(p<0.05),血清IL-12、IFN-γ水平降低,IL-4水平升高。结论:随着泡球蚴感染时间延长,负性协同刺激分子Tim-3和Galectin-9表达及CD4~+Tim-3~+T细胞均增加,细胞因子IL-12、IFN-γ降低,而IL-4增高,表明Th1型免疫应答受到抑制,Tim-3/Galectin-9信号通路可能通过调节Th1/Th2型细胞因子的产生,参与泡球蚴持续性感染的发展。体外实验表明增加配体Galectin-9诱导T淋巴细胞凋亡,导致Th1细胞因子减少,可能是Tim-3/Galectin-9信号通路的激活使Th1/Th2细胞失衡,有助于泡球蚴逃逸宿主的免疫应答,而长期生存。