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本研究以3-6月龄荷斯坦母犊牛为研究对象,采用氨基酸部分扣除法,研究扣除日粮中部分赖氨酸(Lys)、蛋氨酸(Met)和苏氨酸(Thr)对此阶段犊牛的生长性能、瘤胃内环境、氮代谢、肝脏代谢及基因表达的影响,旨在探究母犊牛日粮的Lys、Met和Thr限制性顺序和基于最佳氮沉积的适宜比例。选取72头84日龄左右中国荷斯坦母犊牛,按照体重和出生时间相近原则随机分为4个处理组,限量饲喂4种不同氨基酸模式的日粮,分别为氨基酸平衡组(PC)、赖氨酸部分扣除组(PCLys)、蛋氨酸部分扣除组(PCMet)和苏氨酸部分扣除组(PCThr),氨基酸扣除量均为PC组的30%。试验期97天,其中预饲期7天,正试期90天,所选氨基酸添加剂均为过瘤胃氨基酸。第一部分:部分扣除Lys、Met和Thr对3-6月龄母犊牛生长性能及日粮养分消化代谢的影响本试验旨在研究Lys、Met和Thr部分扣除对3-6月龄荷斯坦母犊牛生长和日粮养分消化代谢的影响。于正试期每天记录犊牛采食量,在正试期第1、30、60、90天测定犊牛体重、体尺和乳头长度;在132-138和173-179日龄每组分别选取6头健康犊牛进行2期消化代谢试验,收集粪、尿和饲料样品,测定营养物质表观消化率及氮代谢。结果表明,扣除Lys显著降低3-6月龄犊牛饲料转化效率(P<0.05),日增重(ADG)为各组最低(P>0.05),扣除Met和Thr对3-6月龄犊牛ADG和饲料转化效率没有显著影响(P>0.05);扣除Lys或Thr显著降低犊牛粪便评分(P<0.05);扣除Lys、Met和Thr均不影响犊牛体尺以及养分表观消化率(P>0.05),但扣除Lys显著降低173-179日龄犊牛氮利用率和氮生物学价值(P<0.05);基于氮沉积确定Lys为第一限制性氨基酸,随后依次为Met和Thr,Lys、Met和Thr的适宜氨基酸模式为135-138日龄时100:29:53,176-179日龄时100:31:57。总之,在本试验设定的氨基酸平衡日粮基础上,扣除Lys对犊牛生长发育和氮代谢有不利影响,扣除Met和Thr对犊牛无明显影响。基于氨基酸扣除对氮沉积的影响,此阶段犊牛氨基酸限制性顺序及适宜比例分别为:Lys>Met>Thr,适宜比例为135-138日龄时100:29:53,176-179日龄时100:31:57。第二部分:部分扣除Lys、Met和Thr对3-6月龄母犊牛肝脏代谢物和基因表达的影响本试验旨在研究Lys、Met和Thr部分扣除对3-6月龄荷斯坦母犊牛肝脏代谢和基因表达的影响。于正试期第90天每组选取3头犊牛活体肝脏采样并通过代谢组学和转录组学测定代谢物含量和基因表达量的变化。互作网络通路分析的结果揭示,Met和Thr扣除对肝脏代谢物含量和基因表达无显著影响(P>0.05)。Lys扣除导致肝脏中去甲肾上腺素、5’-单磷酸腺苷、乙酰辅酶A和辅酶A含量显著降低(P<0.05),显著差异代谢物富集到的脂肪细胞中脂质分解通路和脂肪酸分解通路显著下调(P<0.05)。此外,共识别到8个显著差异表达基因,其中,ADRB2、WFDC2和CLDN4的变化与抑制脂质分解有关,CCRN4L、FOSL2和ARG2的变化与抑制脂质合成有关。相关性分析结果表明显著差异代谢物和显著差异表达基因之间存在相关性,其中,辅酶A与所有差异表达基因之间均有强相关关系(0.82≤|r|≤0.96),乙酰辅酶A和5’-单磷酸腺苷与CCRN4L之间有强相关关系(0.90≤|r|≤0.92)。所以,日粮中扣除30%的Met和Thr对肝脏代谢和基因表达没有影响,而扣除30%的Lys通过抑制脂质合成与分解来影响肝脏脂质代谢。第三部分:部分扣除Lys、Met和Thr对3-6月龄母犊牛瘤胃发酵和微生物区系的影响本试验旨在研究Lys、Met和Thr部分扣除对3-6月龄荷斯坦母犊牛瘤胃发酵和微生物区系的影响。在饲养试验的正试期第90天每组选取5头犊牛采集瘤胃液,用于测定瘤胃发酵参数和微生物区系。结果显示,扣除Lys、Met和Thr不影响瘤胃发酵参数和α多样性(P>0.05),扣除Lys显著降低属于Firmicutes的多个菌属的相对丰度(P<0.05),包括Sharpea、[Ruminococcus]gauvreauii group和[Eubacterium]coprostanoligenes group。扣除Thr显著增加Succinivibrionaceae的相对丰度(P<0.05)。总之,扣除日粮30%的Lys、Met和Thr不影响母犊牛瘤胃发酵参数和微生物多样性。综上,扣除日粮30%的Lys会导致日粮氨基酸失衡,抑制肝脏中精氨酸酶基因的表达并增加尿素的形成,尿素氮排放增加,日粮氮生物学价值降低,从而降低3-6月龄荷斯坦母犊牛的饲料利用率。此外,在扣除Lys后,肝脏脂质合成与分解均受到抑制,脂质代谢紊乱。但扣除Met或Thr对犊牛生长发育没有影响。在玉米-苜蓿-豆粕型日粮中,当Lys含量为1.21%,基于最佳氮沉积获得此阶段犊牛氨基酸限制性顺序及适宜比例分别为:Lys>Met>Thr,适宜比例为135-138日龄时100:29:53,176-179日龄时100:31:57。