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猪瘟（classical swine fever，CSF）是由黄病毒科瘟病毒属的猪瘟病毒（classicalswine fever virus，CSFV）引起的一种重大传染病，具有很高的死亡率，对我国生猪产业造成巨大的损害。CSFV是单股正链RNA病毒，基因组大小约为12.3kb，编码一个大的多聚体蛋白，蛋白酶将其裂解成12种蛋白，包括8种非结构蛋白（P7、Npro、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B）和4种结构蛋白（囊膜糖蛋白Erns、衣壳蛋白C、E1、E2），其中，5′-UTR、3′-UTR、NS5B基因序列比较保守，而NS5B常用于CSFV基因分型。目前，我国猪瘟的防控主要采用猪瘟兔化弱毒疫苗（HCLV）免疫，但是由于缺乏相应的血清学标志和配套的鉴别检测方法，其在我国的大规模应用，使得通过抗体检测很难区分免疫弱毒和野毒感染，不利于猪瘟的净化。针对猪瘟病毒野毒感染与疫苗免疫鉴别诊断的关键问题，本研究参照GenBank中登录的CSFV标准强毒株（shimen、Alfort、Brescia等）、疫苗株（HCLV、Chinese C、Rimes等）、不同基因亚型的CSFV野毒株以及牛病毒性腹泻病毒1型（BVDV-1）和牛病毒性腹泻病毒2型（BVDV-2）的全基因组序列，利用DNAstar软件系统比较分析猪瘟强弱毒株的序列差异，设计一套分别针对猪瘟弱毒与强毒的特异性环介导等温扩增（LAMP）引物，优化LAMP反应体系与反应条件，分别建立CSFV强毒株和弱毒疫苗株的LAMP检测方法。结果表明65℃恒温作用50min即可完成LAMP扩增，LAMP扩增产物用罗丹明B指示剂肉眼观察颜色变化，阳性呈黄色，阴性呈橙红色；用琼脂糖凝胶电泳进行检测，阳性扩增有特异性梯形条带产生。经检测，猪瘟强毒株的特异性LAMP检测方法对猪瘟弱毒疫苗及其他猪源病毒均无特异性扩增，猪瘟弱毒疫苗株的LAMP检测方法亦如此，特异性良好，同时建立的LAMP检测方法比RT-PCR灵敏度高出1000倍，且重复性稳定性良好。用建立的LAMP方法和RT-PCR方法检测20份猪病料，符合率为90.91%。因此，本实验建立的猪瘟强毒株与弱毒疫苗株的LAMP检测技术是一种快速准确，特异性好，灵敏度高，适合基层使用的方法，真正实现了对病原微生物核酸的特异、敏感、高效和快捷检测，为我国猪瘟防控与净化提供技术支撑，对动物疫病多重感染的鉴别检测具有重要意义。