FAT10介导miR-34a对肝癌放疗敏感性作用的研究

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目的:通过RNA干扰特异性下调肝癌细胞HepG2及MHCC-97H中FAT10基因的表达,探讨FAT10对miR-34a的调控及对肝癌细胞放疗敏感性作用的影响。方法:1、将针对FAT10的siRNA转染到肝癌细胞株HepG2和MHCC-97H中,通过荧光定量PCR和western blot检测FAT10mRNA和蛋白的表达变化情况。2、将细胞分成:control,siRNA(-),FAT10-siRNA,电离辐射(IR),IR+siRNA(-),IR+FAT10-siRNA六组,通过荧光定量PCR检测miR-34a表达,Western blot检测Bcl-2及Bax蛋白的表达变化。3、绘制细胞生长曲线及流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况。结果:1、干扰FAT10后肝癌细胞的FAT10mRNA和蛋白的表达受到明显抑制,2、实时荧光定量PCR及Western blot结果显示FAT10-siRNA组、IR+siRNA(-)组和IR组的miR-34a表达明显升高,Bcl-2的蛋白表达明显降低,Bax蛋白表达明显增高,而IR+FAT10-siRNA组表达变化更加明显3、流式细胞仪检测表明干扰FAT10使细胞阻滞在G0/G1期,IR照射使细胞阻滞在G2/M期。并且干扰FAT10和IR都可诱发细胞凋亡,而IR+FAT10-siRNA组凋亡更为明显。结论:干扰FAT10后miR-34a表达明显升高、Bcl-2的蛋白表达明显降低、Bax蛋白表达明显增高,从而明显增强肝癌细胞的放疗敏感性。
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