基于GFP标记的镉生物传感器构建及其对镉毒性的检测

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利用本实验室保存的两株高抗重金属的细菌为出发菌株,导入gfp标记的质粒构建出两株生物传感器。研究了GFP标记菌株的发光定量方法及其在Cd毒性检测中的应用,主要包括gfp标记工程菌的构建、荧光量与镉离子浓度的关系和发光细菌法在Cd毒性检测中的应用等三个方面。结果如下:1.以E.coli为宿主菌,构建含有CadR-EGFP标记的质粒,并将质粒导入大肠杆菌中,在培养基中加入不同浓度镉进行诱导,当镉离子浓度小于0.05 mM时,荧光强度随启动子效率增加而升高;当镉离子浓度在0.05 mM~0.15 mM时,荧光强度受菌体浓度和启动子效率的双重影响,在曲线上呈现先增加后下降的钟型分布;当镉离子浓度大于0.15 mM时,荧光强度主要取决于细菌的浓度,当细菌浓度达到稳定期时,荧光强度保持不变。2.以E.coli(pHQ21)为对象,检测了在不同土壤固体颗粒存在的情况下,传感器荧光量的变化情况,表明在蒙脱石和高岭石存在情况下,传感器荧光强度下降80%,针铁矿和石英砂对传感器几乎无影响。3.将CadR-EGFP标记抗重金属菌株产气肠杆菌NG01和恶臭假单胞菌X4,并将这两种工程菌投入含有重金属的土壤,进行烟草盆栽试验,荧光显微镜能够监测到土壤中传感器发出的强烈荧光信号,说明该传感器能够检测土壤的镉污染,而且添加传感器的烟草生长明显优于未添加传感器处理的烟草,意味着该传感器还能降低土壤中金属镉对烟草的毒害作用。
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