鸡源性大肠埃希氏菌对氟喹诺酮类药物的耐药性研究

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目的利用分子生物学的方法检测太原地区鸡源性大肠埃希氏菌对氟喹诺酮类药物的耐药情况,旨在探讨喹诺酮类药物耐药决定区(QRDR)的促旋酶、拓扑异构酶以及孔道蛋白OmpC、OmpF基因变异情况。方法采集山西省畜牧研究所种鸡场30株鸡源性大肠杆菌,用纸片法筛选出12株耐氟喹诺酮类药菌的大肠杆菌,分别用gyrA、gyrB、parC、parE、ompC、ompF基因相应的引物对12株耐氟喹诺酮类药菌的大肠杆菌进行PCR扩增,并选择其中4株有代表性菌株进行基因序列的测定;用SDS-PAGE电泳对12株耐药菌的外膜蛋白进行分析;用脉冲场凝胶电泳对12株耐药菌进行了流行情况分析。结果所有检测株中,其中12株菌对环丙沙星耐药,占所采集标本的40%;PCR实验gyrA、gyrB、parC、parE、ompC、ompF都有清晰的目的条带;SDS-PAGE电泳结果显示鸡4、鸡5号菌株外膜蛋白OmpC的表达缺失;脉冲场凝胶电泳结果分析显示,存在小范围的流行,爆发流行的几率较小;测序结果显示,送检的测序株都存在GyrA在83或87位氨基酸的变异(Ser-83→Leu;Asp-87→Asn);鸡5号菌株ParC在80位由由丝氨酸变位亮氨酸(Ser-80→Leu),鸡6号菌株ParC在第84位由谷氨酸变为赖氨酸(Glu-84→Lys);鸡5号菌株ParE在89位丝氨酸变为丙氨酸(Ser-89→Ala)。结论山西省畜牧研究所养鸡场的大肠杆菌对氟喹诺酮耐药的主要机制是由于促旋酶在第83氨基酸、87位氨基酸发生一点或同时发生变异造成的;另外,部分菌株伴随parC和ParE的突变可能是造成氟喹诺酮类药物高水平耐药的主要因素。部分菌株存在外膜蛋白OmpC的缺失,但是OmpC的缺失不是造成以上菌株对氟喹诺酮类抗菌素耐药的主要原因。
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