【摘 要】
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轮状病毒(rotavirusRV)属呼肠病毒科(Reoviridae)轮状病毒属(Rotavirus),是引起人类和哺乳动物严重病毒性胃肠炎的重要病原体。RV结构蛋白VP6位于病毒三层衣壳结构的中间层,在
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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轮状病毒(rotavirusRV)属呼肠病毒科(Reoviridae)轮状病毒属(Rotavirus),是引起人类和哺乳动物严重病毒性胃肠炎的重要病原体。RV结构蛋白VP6位于病毒三层衣壳结构的中间层,在病毒粒子的形成过程中起重要的作用。其直接与内层和外层蛋白衣壳接触,这样它就在病毒的2个不同生物学功能(进入细胞和基因组包装)之间起到一个物理受体的作用。
本课题从临床样品中分离的人轮状病毒TB-Chen株VP6基因,通过RT-PCR得到扩增产物。以pET作为表达载体,将VP6蛋白编码基因序列插入到质粒pET中成功构建原核表达质粒pET-VP6。实验表明,带有pET-VP6质粒的大肠杆菌BL21(DE3)可以高效表达目的蛋白VP6,重组表达产物VP6占菌体总蛋白的27.4%,其分子量约为44.9kDa,并且能被豚鼠抗SA11血清抗体识别(Westernblot)。这一结果为进一步研究VP6的结构和功能奠定了重要的物质基础。
对VP6蛋白进一步纯化和复性之后,通过肌肉注射给予豚鼠制备抗VP6抗血清。在体外MA104细胞上对免疫豚鼠血清中和抗体活性测定结果显示,抗VP6抗血清具有保护SA11和Wa病毒株所导致的细胞病变。这个结果表明,抗重组VP6血清抗体具有中和病毒感染活性。VP6蛋白在开发RV疫苗中的价值有待进一步研究评价。
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