胰岛素作为一种血糖调节激素，其介导的降糖作用对缺血性脑损伤具有一定的保护作用。在早期的研究中，许多文献报道，脑缺血后使用胰岛素将血糖控制在正常低限水平可减轻神经元的损害。随着在哺乳动物中枢神经系统发现有胰岛素及其受体存在，胰岛素在中枢神经系统中的作用引起了人们的关注。近年来，一些研究发现，胰岛素对缺血性脑损伤所产生的保护作用，不仅依赖其外周调控血糖的作用，还具有中枢保护作用。但目前胰岛素对缺血性脑损伤产生中枢保护作用的机理尚不清楚，限制了其在缺血性脑损伤临床治疗中的应用。本实验以SD大鼠为对象，通过建立全脑缺血模型，对胰岛素中枢保护作用的机理进行了探讨。 （一）通过改良4-VO法建立标准化的大鼠全脑缺血再灌注模型。本实验利用微型磨钻，扩大大鼠第一颈椎上的双侧翼孔，显露其中穿行的椎 第 回 旱 巨 大 学 博 士 学 位 论 文 一 动脉，在显微镜直视下烧灼并离断椎动脉；通过动态监测大鼠脑缺血前后 的脑电波，以缺血后出现静息脑电作为达到全脑缺血的判断标准。以模型 成功的形态学指标（全脑缺血后7d，海马CAI区神经元出现大部死亡） 比较，当出现静息脑电波后作为达到全脑缺血的判断标准。本研究26只 大鼠达到了上述标准，均可观察到海马 CA区神经元呈现大部死亡。而 传统4VO法以眼球变白，翻正反射消失等作为达到全脑缺血的判断标准， 判定成功的24只大鼠只有ZI只海马CAI区神经元出现大部死亡，其可 靠性仅为87．5％胆厘4卜经形态学指标测定，改良4VO法制作的大鼠全 脑缺血模型的成功率为 86．7ou6／30人高于传统4－VO法的 70op门0卜 结果表明，采用本方法制作大鼠全脑缺血再灌注模型，可明显地提高模型 的成功率和可靠性，这为下一步实验的开展提供了可靠的保证。 （二）以上述法建立大鼠全脑缺血模型。于缺血后即刻经脑室内注入 in胰岛素，对大鼠的血糖变化及全脑缺血后 1、3、5、7d和 8周鼠海马 CA区神经元的形态学改变进行了观察，同时对缺血后 8周大鼠的学习 记忆能力进行了测试。结果表明，鼠脑缺血后胰岛素治疗组血糖与缺血组 比较无显著差异，脑缺血后 3、5、7d及吕周，治疗组海马 CA区正常神 经元计数分别为168．6土10．9，133．5士10．5，105．6士10．l和102．7土10．2， 明显高于缺血组的87．4土5．4，45．4士6．l，10．5士3．4和10．3土3．6。缺血后 8周，经三等分“Y”型迷宫箱测试，治疗组达 9／10正确反应所需的电击 次数为9石土1．4，明显低于缺血组的18石土2．6。本实验结果进一步证实， 胰岛素对全脑缺血后大鼠海马 CA区神经元具有的中枢保护作用，它不 仅能减轻大鼠脑缺血后海马 CA！区神经元的 DND，而且还可减少大鼠学 习记忆功能的损害。 （三）全脑缺血后，利用电镜观察，DNA电泳及原位末端标记技术 对海马 CA区神经元死亡的病理学机制进行了探讨。结果发现，全脑缺 4 第 四 旱 巨 大 学 博 士 学 位 论 文 一 血后，海马CAI区神经元既可通过神经元的坏死途径也可通过凋亡途径 而死亡。全脑缺血后3d，胰岛素治疗组海马CAI区原位末端标记阳性细 胞数为 75．6土 6．7，明显少于缺血组的！43．5士 11．6。上述结果表明，全脑 缺血后经脑室注入胰岛素可减少海马 CA区神经元的凋亡。这可能是其 产生中枢保护作用的主要方面。 （四）用RT．PCR方法检测到全脑缺血后1、3、sd，胰岛素治疗组 海马CAI区Bcl－2，Bclxl及Bax基因的mRNA表达与缺血组比较无明 显差异。经免疫组化染色观察和经Western七lotting定量分析，全脑缺血 后1、3、sd，胰岛素治疗组海马CAI区Bcl－2及Bcl－xl基因的蛋白表达 明显高于缺血组。上述结果说明，全脑缺血后经脑室注入胰岛素，可通过 对BclZ及Bclxl基因合成蛋白过程中翻译途径的调控来促进脑缺血后海 马CAI区BclZ及B。l－xl蛋白的表达，从而减少神经元的凋亡作用。 综上所述，胰岛素对大鼠缺血性脑损伤具有明确的中枢保护作用，它 不仅可减轻脑缺血后中枢神经系统的形态学损害，而?