喹乙醇是一类被限量使用的兽药添加剂,其在动物体中主要代谢为3-甲基喹啉-2-羧酸。这两种化合物对人类的健康造成极大的威胁。本文旨在研究建立检测喹乙醇及其代谢物的免疫学检测方法。本文合成了针对喹乙醇及其代谢物的半抗原,尤其在代谢物检测方面,首先利用一种新颖简单的方法合成了代谢物3-甲基喹啉-2-羧酸,然后合成了四种新的半抗原,然后分别与牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA),卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)交联,制备成免疫抗原,包被抗原。用免疫原免疫新西兰白兔制备抗血清,得到特异性高的抗体,效价达到了32000,通过筛选,得到了针对代谢物的多克隆抗体。通过ELISA优化,喹乙醇的IC50值达到了151.89ng/mL,检测限为4.33ng/mL;3-甲基喹啉-2-羧酸的IC50值达到了3.84ng/mL,检测限为0.25ng/mL。文章利用代谢物的抗体,建立了基于抗体抗原反应和纳米DNA技术的荧光猝灭高灵敏检测方法,检测更加灵敏,首先合成了纳米磁性粒子和纳米金粒子,通过将DNA与纳米金粒子偶联,得到了纳米探针,并代替传统的HRP与二抗进行偶联,之后在流动注射系统中进行完免疫反应后,对纳米探针上的DNA进行变性,收集得到了单链DNA序列,再将这些单链DNA与另一种粒径更小的且具有互补寡核苷酸序列的金纳米探针进行杂交,信号被放大后,利用荧光猝灭进行检测,检测限被大大改善,达到了7.52pg/mL,检测范围为8.5到60pg/mL。