卵巢来源的外泌体对巨噬细胞M2极化的调节作用

来源 :昆明医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:herirong
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[目的]提取和比较卵巢组织来源外泌体(正常卵巢、卵巢良性肿瘤、卵巢交界性肿瘤、早期卵巢恶性肿瘤、晚期卵巢恶性肿瘤)的差异,探究卵巢来源外泌体对巨噬细胞M2极化的调节作用以及对于上皮性卵巢癌发生发展的影响。[方法]1.收集2021年1月至2022年1月就诊于昆明医科大学第三附属医院妇科住院行卵巢切除手术的患者。2.使用超速离心法提取卵巢组织来源的外泌体(正常卵巢、卵巢良性肿瘤、卵巢交界性肿瘤、早期卵巢恶性肿瘤、晚期卵巢恶性肿瘤),电镜下观察外泌体形态,测定不同分组外泌体浓度,使用蛋白质印迹法(Western Blot,WB)检测外泌体标记物CD81、CD9的表达量。3.将不同卵巢组织来源的外泌体与人单核细胞白血病细胞(Humanmyeloid leukemia mononuclear cells,THP-1)共同培养,采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time,qRT-PCR)法检测经典活化的M1型巨噬细胞标志物(IL-12、IL-1β、iNOS、CD86)和替代性活化的M2型巨噬细胞标志物(IL-10、IL-4、M-CSF、CD206)的表达水平;采用WB法测定M1型巨噬细胞标志物CD86和M2型巨噬细胞标志物CD206表达水平。[结果]1.透射电镜观察不同卵巢组织来源的外泌体,对比外观、形态未见明显差异,粒径约为50-150 nm,均呈现圆盘状的膜性囊泡样结构;WB检测各组样本均表达CD81、CD9,证实本实验提取的外泌体浓度和特异性较高;平均浓度测定,正常卵巢组织:40.98±28.65 Particles/ml;卵巢良性肿瘤:74.16±24.01 Particles/ml;卵巢交界性肿瘤:72.14±42.39 Particles/ml;卵巢恶性肿瘤早期:65.53±38.40 Particles/ml;卵巢恶性肿瘤晚期:31.55±20.26 Particles/ml。相比于正常卵巢组,良性组,交界性组,恶性早期组的肿瘤细胞分泌更多的外泌体,而恶性晚期组外泌体量少于正常组,差异均无统计学意义(P>0.05)。2.通过qRT-PCR检测发现,相较于正常卵巢组,M1型标志物IL-12、IL-1β、iNOS、CD86在良性组高表达(P<0.05),在交界性组,恶性早期组,恶性晚期组呈低表达(P<0.01)。M2型标志物IL-10、IL-4、M-CSF、CD206在交界性组、恶性早期组、恶性晚期组高表达(P<0.05)。3.WB结果显示,M1型标志物CD86在不同实验分组中的相对表达量,按正常卵巢组,良性组,交界性组,恶性早期组,恶性晚期组,呈递减趋势,有统计学差异(P=0.0041);M2型标志物CD206的相对表达量,呈递增趋势,有统计学差异(P=0.007)。[结论]1.正常卵巢组织和不同发展阶段卵巢肿瘤来源的外泌体在外观、形态上无明显差异。2.不同卵巢组织来源的外泌体可以促进单核细胞极化,且随着分期进展表现出不同的趋势:在肿瘤发展初期,单核细胞有向M1极化的趋势,随着肿瘤分期的进展,单核细胞向M1极化程度逐渐衰减,向M2的极化程度逐步加深。3.在卵巢肿瘤中,M2样巨噬细胞高表达与肿瘤分期呈正相关。
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