【摘 要】
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花青素是自然界一类广泛存在于植物的花瓣、果实、茎和叶的水溶性天然色素,具有抗氧化作用,在植物生长发育过程中发挥着有益的作用,并且对人体健康有益。茄子在茄科蔬菜生产中占有重要的地位,我国是世界上茄子种植面积最大的国家。食用富含花青素的紫茄对人体健康有益,紫茄因此倍受人们的欢迎。广东省农科院蔬菜研究所在茄子育种实践中发现2对上位性效应基因控制的茄子果色遗传现象。采用SLAF-Seq与BSA关联分析技术
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花青素是自然界一类广泛存在于植物的花瓣、果实、茎和叶的水溶性天然色素,具有抗氧化作用,在植物生长发育过程中发挥着有益的作用,并且对人体健康有益。茄子在茄科蔬菜生产中占有重要的地位,我国是世界上茄子种植面积最大的国家。食用富含花青素的紫茄对人体健康有益,紫茄因此倍受人们的欢迎。广东省农科院蔬菜研究所在茄子育种实践中发现2对上位性效应基因控制的茄子果色遗传现象。采用SLAF-Seq与BSA关联分析技术结合,将控制茄子果色的上位性基因D定位在10号染色体上,在紧密关联区域内进行基因功能注释,发现了一个MYB转录因子为D基因的候选基因。因此,本论文在前期茄子果色上位D基因定位基础上,通过在D基因突变体白果色父本中过量表达SmMYB1基因,以及通过VIGS技术沉默紫红果色3316F1中SmMYB1基因,研究SmMYB1基因对茄子果皮花青素合成的作用。主要研究结果如下:1.通过基因克隆获得父本和母本的SmMYB1基因启动子、DNA全长序列和m RNA序列,结果表明父本启动子序列长度为1601 bp,母本启动子序列长度为1600bp,父本启动子-1153多1个G碱基插入,母本启动子序列同参考基因(KT727965)。母本SmMYB1基因DNA全长1230 bp,由3个外显子组成,长度分别为136 bp、130 bp和505 bp以及两个内含子,长度分别为88 bp和371 bp,c DNA序列为771 bp。父本的SmMYB1基因DNA全长1224 bp,由3个外显子组成,长度分别为130 bp、130 bp和505 bp,以及两个内含子,长度分别为88 bp和371 bp,c DNA序列为765 bp。父本比母本缺失6个碱基(GCTAGA),差异序列在第1外显子编码区序列,编码43位和44位氨基酸序列,且缺少的氨基酸位于MYB蛋白中高度保守的R2 DNA结合区域,从而影响MYB蛋白的转录激活功能,最终导致不能正常合成花青素。2.利用实时荧光定量PCR技术,对候选基因SmMYB1表达进行分析发现,SmMYB1基因在不同组织部位及不同发育阶段的表达模式不同。在果皮中母本的SmMYB1基因表达显著高于父本,父本中表达量极低(或不表达),F1的表达量趋中,这表明父本SmMYB1的缺失突变引起果皮中该基因表达下调。SmMYB1基因在母本商品果肉和花中表达量较高,父本的茎中表达量较高,F1的SmMYB1基因在茎、花中表达量较高。SmMYB1表达量的高低与茄子的花青素积累呈正相关。3.通过对候选基因SmMYB1进行VIGS验证,结果表明两个不同载体p TRV2-SmMYB1-1和p TRV2-SmMYB1-2均能有效的抑制花青素的合成,从而使果皮颜色漂白。对不同载体处理的材料进行实时荧光定量PCR表达分析,结果表明VIGS处理材料中SmMYB1相对表达量均显著低于阴性对照。4.构建了p BWA(V)HS-SmMYB1茄子过表达载体,通过农杆菌介导法侵染外植体,在侵染的外植体的愈伤组织上观察到紫红色组织,说明过表达SmMYB1基因恢复和提高了白果色父本突变体愈伤组织上花青素合成,从而证明SmMYB1即为茄子果色上位D基因位点的候选基因。
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