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阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）早期即出现明显的昼夜节律紊乱现象,且在疾病后期会对患者学习记忆能力造成更严重的不良影响。β淀粉样蛋白（Amyloid-β,Aβ）异常沉积是AD发生发展的中心环节,Aβ过多沉积可以影响关键生物钟基因节律性表达,并且导致学习记忆能力下降。目前临床上针对AD尚缺乏确切有效的治疗药物,研究表明,2型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus,T2DM）与AD有多方面类似的病理生理特点,治疗T2DM的常用药物——胰高血糖素样肽1（Glucagon-like peptide-1,GLP-1）和葡萄糖依赖性促胰岛素多肽（Glucose-dependent insulinotropic polypeptide,GIP）能够通过血脑屏障,激活相应GLP-1受体（GLP-1R）和GIP受体（GIPR）改善AD。已有研究表明,GLP-1R/GIPR双受体激动剂DA-JC1具有神经保护作用,然而它能否改善Aβ31-35所致昼夜节律紊乱,进而改善学习记忆相关蛋白表达降低尚不明确。本研究旨在探讨新型GLP-1R/GIPR双受体激动剂DA-JC1能否改善Aβ核心毒性片段Aβ31-35所致的昼夜节律紊乱及学习记忆相关蛋白表达减少,并进一步探讨per2基因沉默所致昼夜节律紊乱对学习记忆相关蛋白表达异常的影响。动物跑轮行为学实验结果发现,小鼠海马内注射Aβ31-35可导致跑轮昼夜节律紊乱,而连续1 w腹腔注射DA-JC1明显改善小鼠昼夜节律紊乱现象。在离体水平上,Aβ31-35可以诱导HT22神经细胞Per1节律基因/蛋白表达异常,DA-JC1预处理对Per1节律基因/蛋白异常有显著的改善作用。此外,Aβ31-35可以诱导HT22神经细胞学习记忆相关蛋白突触素（synaptophysin,SYP）、生长相关蛋白-43（growth-associated protein 43,GAP-43）表达水平下降,DA-JC1预处理后可以部分恢复其表达水平。使用慢病毒感染沉默HT22细胞per2基因后,per1基因表达丧失节律性,且学习记忆相关蛋白SYP和GAP-43表达降低,由此我们认为DA-JC1可以通过改善Aβ31-35所致昼夜节律紊乱进而逆转学习记忆相关蛋白表达下降。第一部分DA-JC1改善Aβ31-35所致C57BL/6小鼠自主跑轮节律紊乱及小鼠海马HT22神经细胞生物钟基因节律表达紊乱目的:观察新型GLP-1R/GIPR双受体激动剂DA-JC1对Aβ31-35所致昼夜节律紊乱是否有改善作用。方法:（1）选取6-8周龄雄性C57BL/6小鼠,分四组进行跑轮行为学实验,分别为对照组、Aβ31-35组、DA-JC1预处理组、DA-JC1单独处理组。（2）HT22神经细胞随机分为对照组、Aβ31-35组、DA-JC1预处理组、DA-JC1单独处理组,通过MTT法检测细胞存活率,实时荧光定量PCR（Real-time PCR,RT-PCR）检测各CT时间点per1基因表达水平,蛋白印迹法（Western Blot）检测per1差异最大CT时间的PER1蛋白表达水平。结果:（1）Aβ31-35组小鼠自由运转周期较对照组显著延长（23.80±0.06 h vs 23.54±0.07 h）,每日运动量显著降低（635.68±47.63 counts/d vs 1009.1±38.42 counts/d）,而DA-JC1预处理后显著缩短了自由运转周期（23.61±0.06 h）,提高了每天运动量（777.5±23.15 counts/d）。（2）与对照组（100.0±3.6%）相比,5μM Aβ31-35处理组HT22细胞存活率显著降低（78.7±3.4%）,而DA-JC1预处理1 h后细胞存活率明显回升（89.2±2.3%）。（3）Aβ31-35导致HT22细胞Per1表达异常,表现在CT12（per1基因:0.58±0.04;PER1蛋白:0.74±0.07）时较对照组（per1基因:1.00±0.09;PER1蛋白:1.01±0.07）显著降低,DA-JC1可以逆转Aβ31-35在CT12诱导的HT22细胞Per1表达水平降低（per1基因:0.79±0.11;PER1蛋白:0.99±0.05）。结论:DA-JC1对Aβ31-35所致的C57BL/6小鼠昼夜节律紊乱及HT22细胞Per1表达异常有改善作用。第二部分DA-JC1逆转Aβ31-35所致小鼠海马HT22神经细胞学习记忆相关蛋白SYP、GAP-43表达降低目的:观察DA-JC1对Aβ31-35所致小鼠海马HT22神经细胞学习记忆相关蛋白SYP、GAP-43表达异常是否有改善作用。方法:将HT22神经细胞随机分为对照组、Aβ31-35组、DA-JC1预处理组、DA-JC1组,采用Western blot方法检测各组细胞中学习记忆相关蛋白SYP、GAP-43表达水平,观察DA-JC1预处理是否对Aβ31-35所致SYP、GAP-43蛋白表达下降有改善作用。结果:（1）通过Western Blot对HT22细胞中SYP的表达情况进行检测,结果表明,Aβ31-35组SYP表达水平（0.85±0.03）较对照组（1.00±0.04）显著降低,而DA-JC1预处理改善了其表达下降情况（1.01±0.03）。（2）采用Western Blot方法检测HT22细胞中GAP-43的表达情况,结果表明,Aβ31-35组GAP-43蛋白表达（0.86±0.03）显著低于对照组（1.00±0.03）,而DA-JC1预处理明显上调了其表达水平（0.97±0.06）。结论:DA-JC1有效改善Aβ31-35所致HT22神经细胞学习记忆相关蛋白表达降低。第三部分per2基因沉默导致的HT22神经细胞昼夜节律紊乱可以诱导学习记忆相关蛋白SYP、GAP-43表达降低目的:慢病毒感染HT22细胞沉默per2基因,观察节律紊乱的HT22细胞中学习记忆相关蛋白SYP、GAP-43表达情况。方法:（1）设置梯度感染复数（MOI）感染HT22细胞,以确定最佳MOI。（2）使用慢病毒感染HT22神经细胞,Western Blot检测PER2蛋白表达量,以明确感染效果。（3）RT-PCR检测per2-/-的HT22细胞中各CT时间点per1基因表达水平。（4）Western Blot检测per2-/-的HT22细胞中学习记忆相关蛋白SYP、GAP-43表达量。结果:（1）当MOI为60时,HT22细胞荧光值与最低MOI组开始有统计学差异（P<0.05）。（2）慢病毒感染HT22细胞有效降低PER2蛋白表达量（0.42±0.03 vs 1.00±0.09）。（3）per2-/-后HT22细胞中per1基因表达水平的振幅较对照组显著降低（0.43±0.11 vs 1.00±0.18）。（4）per2-/-的HT22细胞中学习记忆相关蛋白SYP、GAP-43表达降低（SYP:0.80±0.02 vs 1.00±0.04;GAP-43:0.81±0.03 vs 1.00±0.03）。结论:per2基因沉默导致HT22细胞节律紊乱导致学习记忆相关蛋白SYP、GAP-43表达降低。