目的：运用基于Taqman探针法的实时荧光PCR技术检测胆囊结石患者胆汁及胆石标本中的华支睾吸虫DNA,并对其检测效价进行对比评估。方法：随机选取2011年8-9月份30例实施内镜取石保胆手术患者的胆汁及胆囊结石,首先分别对胆汁及胆石标本进行显微镜检,然后提取其DNA。同时收集患者的相应粪便标本,进行显微镜检检测。根据华支睾吸虫细胞色素C氧化酶亚基1基因,设计合成特异性的引物、TaqMan探针,建立华支睾吸虫实时荧光PCR检测方法,并做灵敏度及特异性分析,然后对胆汁及胆石标本DNA进行基因检测。结果：①该实验建立的实时荧光PCR检测方法对华支睾吸虫成虫DNA的最低检测阈值可达0.1pg,且不与日本血吸虫、蛔虫、广州圆线虫、弓形虫产生阳性扩增反应。②胆囊胆汁标本中有14例镜检发现虫卵(阳性率46.7%),胆汁实时荧光PCR检测结果与显微镜检结果一致(符合率100%)；胆囊结石中16例镜检发现虫卵(阳性率53.3%),19例实时荧光PCR结果阳性(阳性率63.3%)；粪便标本中9例镜检发现虫卵(阳性率30%)。结论：①华支睾吸虫细胞色素C氧化酶亚基1基因可作为胆囊结石患者胆汁及胆石标本中华支睾吸成虫和虫卵的诊断基因。②实时荧光定量PCR技术检测胆囊结石标本中华支睾吸虫细胞色素C氧化酶亚基1基因是判定华支睾吸虫感染的有效手段。此方法快速、简便、准确性高,对取石保胆患者的术后治疗、预防复发以及提高胆囊结石合并华支睾吸虫感染的诊断方面具有重要的指导意义。