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柔嫩艾美耳球虫属于顶复门寄生原虫，对养禽业危害巨大。这就需要对它的生物学特性进行深入的了解。转基因技术是目前研究生物学特性的有效手段，已经广泛应用于与柔嫩艾美耳球虫亲缘关系密切的弓形虫和疟原虫。但是由于体外培养困难等原因，对柔嫩艾美耳球虫的转染仍然是个巨大的挑战。本实验中用黄色荧光蛋白和红色荧光蛋白作为报告基因，对柔嫩艾美耳球虫的瞬间转染进行了研究。以卵囊阶段提取的基因组DNA为模板，用PCR方法，分别得到了组蛋白4、肌动蛋白、微管蛋白、内膜复合物以及肌动蛋白解聚因子的启动子。同时用PCR方法也得到了肌动蛋白的下游调控序列。这样以黄色荧光蛋白和红色荧光蛋白为报告基因，其5，端和3，端分别是各个启动子片段和肌动蛋白下游调控序列。构建了pACT-YFP、pHIS-YFP、 pHIS-RFP、pTUB-YFP、pIMC-RFP和pADF-YFP表达载体。然后用构建好的表达载体对柔嫩艾美耳球虫的子孢子阶段进行转染，转染条件是2000V，电容25μF,Cytomix buffer为电击介质。电转染后室温静置20分钟后接种到MDBK细胞上，置于细胞培箱中进行培养，温度设置为41℃。结果发现：用pACT-YFP、pHIS-YFP、pHIS-RFP转染的子孢子可在接种后19小时，可以观察到EYFP和RFP的表达。接种后43-64小时，可观察到表达EYFP和RFP的第一代未成熟的裂殖体；在接种后82—84小时，可观察到表达荧光的第一代成熟的裂殖体以及释放出的裂殖子。转染效率为15-20个/10<7>。对于plMC-RFP和pADF-YFP，由于转染效率较低，观察到的表达荧光的虫体极少，只有2—5个/10<’7>，只观察到处于第一代未成熟裂殖体的虫体。为了探讨柔嫩艾美耳球虫的调控序列能否驱动荧光蛋白在弓形虫体内表达，用pACT-YFP、pHIS-YFP、pTUB-YFP对弓形虫的速殖子阶段进行了转染，转染条件同前。转染后的速殖子接种到MDBK细胞上，在37℃下进行培养。观察发现，在速殖子进行分裂形成假包囊直到第二代速殖子释放出(总共约48小时)的过程中均可见到黄色荧光蛋白的高效表达。本实验的结果表明，柔嫩艾美耳球虫自身的启动子(Actin，Histone4，ADF,IMC)可以驱动RFP和YFP在其体内的高效表达；同时，弓形虫也可以识别完全来自柔嫩艾美耳球虫的启动子(Actin，Tubulin，Histone4)，能够在其体内高效表达黄色荧光蛋白，因此也可以将用于弓形虫的研究方法直接用于柔嫩艾美耳球虫的研究。