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第一部分湖南汉族经典1型糖尿病HLA-DR-DQ基因多态性分析 目的:系统探讨湖南汉族经典1型糖尿病(T1DM)易感性与保护性HLA-DR-DQ基因型与单体型。 方法:采用聚合酶链反应直接测序法(PCR-SBT)对558例经典T1DM和930例正常对照的HLA-DRB1、DQA1与DQB1位点进行基因分型，通过PHASE软件进行单体型构建。病例组与对照组的基因频率比较采用卡方检验。 结果: ①9种DR与DQ等位基因在T1DM中的频率显著增高，相对风险最高的前3种为:DRB1*0301(21.37％ vs.5.78％，OR=4.43，注:患者组vs.对照组，Pc＜0.001，以下同)、 DRB1*0401(2.25％ vs.0.60％, OR=3.84)、DQB1*0201(23.46％ vs.7.4％, OR=3.84);16种等位基因在T1DM中的频率显著减低，保护性最强的前3种分别为:DRB1*1301(0.41％ vs.2.45％,OR=0.16)、DRB1*0406(0.51％vs.2.92％, OR=0.17)、DQB1*0602(1.03％ vs.4.79％, OR=0.21)。 ②13种DR与DQ基因型在T1DM中的频率显著增加，相对风险最高的前3种基因型为:DQA1*03/03(39.76％ vs.1.81％，OR=35.83)、 DQA1*03/05(21.67％ vs.1.03％,OR=26.49)、 DRB1*0405/0701(1.84％ vs.0.12％, OR=15.71);7种基因型在T1DM中的频率显著减低，保护性最强的前3种为:DRB1*0803/0803(0.61％ vs.5.13％, OR=0.11)、DQA1*0102/0102(0.60％ vs.3.88％, OR=0.15)与DQA1*010X/0102(010X=0101或0104;0.80％ vs.4.91％,OR=0.16)。 ③19种DR-DQ单体型在T1DM中的频率显著增加，相对风险最高的前3种为:DRB1*0901-DQA1*03(30.73％ vs.0.22％, OR=203.07)、 DRB1*0301-DQA1*03(6.19％ vs.0.07％,OR=90.77)、DQA1*03-DQB1*0201(3.52％ vs.0.07％, OR=51.82);22种DR-DQ单体型在T1DM中的频率显著减低，保护性最强的前3种为:DRB1*0803-DQA1*03-DQB1*0601(0.12％ vs.3.95％, OR=0.03)、DRB1*0901-DQA1*0102(0.11％ vs.1.96％, OR=0.06)、DQA1*03-DQB1*0601(0.325 vs.4.57％, OR=0.07)。 ④本研究人群（中国人）与高加索人、日本人及韩国人比，四个种族共有的等位基因为易感性的DQB1*0303与DRB1*0405，保护性的DQB1*0301, DQB1*0601与DQB1*0602。1种保护性等位基因(DQB1*0502)、4种易感单体型(DRB1*0301-DQB1*0303、DRB1*0301-DQA1*03-DQB1*020、 DRB1*0301-DQA1*03-DQB1*0303与DRB1*0901-DQA1*05-DQB1*0201)与3种保护性单体型(DRB1*0406-DQB1*0302、DRB1*0803-DQA1*03-DQB1*0601、DRB1*1202-DQA1*060Y-DQB1*0301)为中国汉族人群特有性的风险等位基因或单体型。 结论:本研究发现中国汉族8种特有性的DR-DQ风险等位基因与单体型， HLA-DR-DQ易感基因型与单体型对T1DM的遗传效应有显著的异质性。 第二部分锌转运体8自身抗体与HLA-DR-DQ基因多态性关联 目的:探讨锌转运体8自身抗体(ZnT8A)与HLA-DR-DQ基因多态性的关联，以阐明ZnT8A产生的HLA遗传学基础。 方法:选取422例由放射配体法检测的ZnT8A、谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)或蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A)阳性的1型糖尿病(T1DM)患者，同时采用PCR-直接测序法进行患者HLA-DR-DQ基因分型。采用二元关联检验与卡方检验分析ZnT8A与HLA-DR-DQ易感基因型及单体型的关系。 结果: ①湖南汉族经典T1DM患者ZnT8A阳性率为36.3％(153/422)，其中单一ZnT8A阳性率为6.8％(28/412)，ZnT8A与GADA双阳性率为25.1％(104/415);ZnT8A与IA-2A双阳率者为18.2％(75/412);ZnT8A、GADA与IA-2A三阳性率为15％(62/412)。 ②ZnT8A滴度与易感基因DQA1*05(γ2=0.126，P=0.012)及DQA1*03/05(γ2=0.138，P=0.006)呈正相关，与易感基因型DQB1*0303/0303(γ2=0.142，P=0.006)及DRB1*0901/0901(γ2=-0.114，P=0.029)呈负相关。 ③携带基因型DQA1*03/05(45.8％ vs.32.7％)的T1DM患者ZnT8A阳性率分别显著高于非携带者(P＜0.05);而携带基因型DQB1*0303/0303(25.0％ vs.38.5％)、DRB1*0901/0901(26.6％ vs.39.2％)、单体型DQA1*0102-DQB1*0601(12.5％ vs.37.2％)与DRB1*0901-DQA1*03(29.6％ vs.41.6％) T1DM患者ZnT8A阳性率分别低于这些基因非携带者(P均＜0.05)。 ④携带易感基因DQA1*03/060Y(75.00％ vs.16.67％)、DQB1*0301/0301(44.44％ vs.17.14％), DRB1*1401-DQA1*010X(80.00％ vs.17.12％)者单一ZnT8A阳性率显著高于非携带者(P均＜0.05);携带易感基因DQA1*03/05(6.98％ vs.16.67％)、DRB1*0901-DQA1*03-DQB1*0303(4.88％ vs.25.35％)者单一ZnT8A阳性率显著低于非携带者。 结论：ZnT8的自身免疫反应与DRB1*1401-DQA1*010X与DRB1*0901-DQA1*03-DQB1*0303单体型有关，结果也进一步表明特异性胰岛自身抗体的产生与HLA-Ⅱ类基因相关。 第三部分湖南汉族1型糖尿病IFIH1基因rs1990760多态性分析 目的:分析患者IFIH1基因rs1990760多态性与湖南汉族急性起病1型糖尿病(T1DM)及成人隐匿性自身免疫性糖尿病(LADA)的关系。 方法:设计病例对照研究，应用TaqMan探针实时荧光PCR技术对930例湖南汉族T1DM患者、434例LADA患者与1010例正常对照的IFIH1基因rs1990760多态性进行基因分型。比较T1DM患者、LADA患者与正常对照等位基因与基因型的频率，并分析rs1990760多态性与临床表型、胰岛自身免疫及HLA-DR-DQ基因型的关系。 结果:①IFIH1基因rs1990760多态性等位基因C(79.8％vs.80.7％)与T(20.2％ vs.19.3％)在T1DM组与对照中频率差异无显著性。CC(63.1％ vs.65.0％), CT(33.5％ vs.31.3％)与TT(3.5％ vs.3.7％)基因型频率分布在两组间亦无统计学意义(P均＞0.05)。②等位基因C与T在LADA组与对照组频率(80.6％ vs.80.7％;19.4％ vs.19.3％)差异无显著性(P＞0.05)，CC，CT，TT基因型频率分布在两组间亦无统计学意义(P均＞0.05)。③TIDM与LADA患者IFIH1基因rs1990760多态性与起病年龄、体重指数、糖化血红蛋白、胰岛功能及代谢指标等临床特征均无相关性（P均＞0.05）。④T1DM患者ZnT8A、GADA与IA-2A的阳性率与滴度在rs1990760多态性CC、CT、TT基因型之间均无显著性差异（P＞0.05）。⑤携带易感DQB1*0303等位基因者C等位基因的频率低于非携带者，具有边界性统计学意义(76.76％ vs.81.42％，P=0.048)。IFIH1基因rs1990760多态性与HLA-DRB1、DQA1、DQBI高危或低危风险基因型无交互作用(P均＞0.05)。 结论:IFIH1基因SNP rs1990760多态性对湖南汉族T1DM与LADA患者无遗传易感作用，与临床特征、胰岛自身免疫及HLA-DR-DQ风险基因均无显著性关联。 第四部分 IFIH1基因rs1990760多态性与1型糖尿病发病风险的Meta分析 目的:综合定量评价IFIH1基因rs1990760多态性与1型糖尿病(T1DM)发病风险的关系。 方法:计算机检索PubMed和Web of Knowledge等数据库，检索时间截至2013年1月1日，提取IFIH1基因rs1990760多态性与T1DM易感性关系的病例-对照研究。以T1DM组与对照组人群等位基因与基因型分布的OR值及其95％CI为效应指标。在加性模型、纯合子模型、显性模型和隐性模型中采用固定或随机效应模型进行Meta分析，并进行发表偏倚评估与敏感性分析。统计分析采用Stata11.0软件。 结果: ①共纳入13个病例对照研究，总计19932例TIDM患者和28606例对照，其中10项研究对象为欧洲血统人群，3项研究对象为亚洲人群。 ②加性模型情况下，IFIH1基因rs1990760多态性等位基因A与T1DM有显著相关性[A vs.G: OR(95％CI)=1.14(1.08～1.22),P=0.000];在显性遗传模型中，AA+AG基因型与T1DM风险有显著相关性[AA+AG vs.GG:OR(95％CI)=1.25(1.16～1.34)，P=0.000];在纯合子比较与隐性遗传模型中，AA基因型与T1DM风险有显著相关性[AA vs.GG: OR(95％CI)=1.36(1.26～1.47)，P=0.000; AA vs.AG+GG: OR(95％CI)=1.159(1.06～1.27),P=0.001];在杂合子比较中，AG基因型与T1DM风险有显著相关性[AG vs.GG:OR(95％CI)=1.15(1.07～1.24), P=0.000]. ③基于人种的亚组分析显示欧洲血统人群中IFIH1基因rs1990760变异位点的等位基因与基因型在所有遗传模型中均与T1DM有显著相关性[A vs.G：OR(95％CI)=1.18(1.11-1.26)，P=0.000];而在亚洲人群中rs1990760变异位点在所有遗传模型中与T1DM发病均无相关性[A vs.G：OR(95％CI)=0.97(0.86-1.08)，P=0.921]。 ④发表偏倚评估未见发表偏倚，敏感性分析提示结果比较稳定可靠。 结论:IFIH1基因rs1990760多态性是欧洲血统人群T1DM患者的遗传风险变异，A等位基因携带者增加T1DM易感性，但rs1990760多态性不是亚洲人群T1DM的遗传危险因素。