矮牵牛PhPHAN基因功能初探及其互作蛋白筛选

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wuliaocanglang
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矮牵牛(Petunia hybrida Vilm)为茄科碧冬茄属,是一种重要的花坛植物,在植物分子生物学研究领域中有着非常重要的地位。花型和叶型均为植物的重要观赏性状。研究者致力于通过多种途径(包括杂交育种、诱变育种、基因工程育种等)改变观赏植物的花型和叶型等性状,以期达到人们的观赏要求。本课题组前期已构建pTRV2-PhCHS-PhPHAN载体,利用pTRV2-PhCHS-PhPHAN处理的矮牵牛植株叶和花发育发生了显著的变化。为了进一步研究PhPHAN的功能及其调控机制,本课题进行了一系列实验。具体结果如下:(1)构建pTRV2-PhPHAN载体,利用VIGS技术沉默PhPHAN。沉默植株花瓣皱缩,开裂;叶出现不对称性,叶片发生褶皱堆积。(2)将pBI121-PhPHAN反义载体转入根癌农杆菌中,运用根癌农杆菌介导法转化矮牵牛幼叶。对得到的10株抗性植株进行PCR检测,初步筛选出8株阳性苗。(3)通过GFP融合蛋白瞬时表达实验确定了PhPHAN亚细胞定位。构建含有PhPHAN和GFP融合的植物表达载体p1403TZ-PhPHAN,用PEG介导法将该载体质粒转化矮牵牛原生质体,荧光显微镜观察融合蛋白的绿色荧光,发现PhPHAN可能定位在细胞核和细胞质中。(4)构建pGBKT7-PhPHAN酵母诱饵载体,利用酵母双杂交技术与矮牵牛cDNA文库进行杂交实验,筛选得到PhPHAN的互作蛋白:单硫醇谷氧还蛋白-S7(GRXS7)和E2F转录因子家族的E2F/DP(DPE2)。分别构建pTRV2-CHS-PhGRXS7和pTRV2-CHS-PhDPE2载体,导入根癌农杆菌,侵染矮牵牛,pTRV2-CHS作为对照,观察发现对照与pTRV2-CHS-PhGRXS7和pTRV2-CHS-PhDPE2处理植株花朵均变白,说明PhGRXS7和PhDPE2已沉默,但是PhGRXS7和PhDPE2侵染植株与对照在植物生长发育中无可见的显著性差异。
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