基于“谱—效”结合的金银花药效物质筛选的初步研究

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金银花为忍冬科植物忍冬的干燥花蕾或带初开的花,为常用清热解毒中药,是临床上公认的常用有效中药。采用传统和现代的分离、分析方法,结合具有高通量、微量等特点的体外抗氧化活性物质的评价方法DPPH和FRAP法评价了不组分的抗氧化活性。根据UPLC图谱与抗氧化活性测定结果,“谱-效”结合,直观分析其起抗氧化活性作用的化学成分。结果发现抗氧化活性物质中主要含出峰时间为4.44,5.14min的两个峰时,物质组分表现为抗氧化活性强烈,并初步判断为异绿原酸化合物。研究金银花类药材UPLC化学指纹图谱,建立了不同产地金银花和山银花的指纹图谱。系统考察了各种因素对制定金银花类药材UPLC指纹图谱的影响。采用相似度作为指纹图谱的评判标准,标定特征峰,建立其对照指纹图谱,并以共有模式为参照,通过《中药指纹图谱相似度计算软件2004A版》,计算得到色谱指纹图谱模拟图谱及其相似度评价结果。指纹图谱聚类分析结果将20个样品分成两大类,第一类主要为金银花类药材,第二类主要为山银花类药材。以产于主产区的金银花药材作为研究对象,应用微量热仪,测定了在37℃条件下大肠杆菌正常条件下和金银花作用下的热谱图,并进行了动力学模型的拟合,得到了一系列的热力学参数。通过主成分分析,金银花热谱图中第一指数生长期生长速率常数K1、第一指数生长期出峰时间T1和第二个指数生长期的最大放热功率P2在体现金银花生物热活性的整体差异上显得尤为重要。将三个参数和化学指纹图谱峰面积进行典型相关分析,结果显示,不同产地金银花的生物热活性的强弱主要受指纹图谱中的3、8、9号峰影响。本研究为中药药效物质的研究提供了一条新途径,即将常规化学、生物学、热化学或者药理学相结合进行“谱-效”关系研究以寻找药效、功效的活性物质及物质基础,以推进我国中医药事业的发展。
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