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胁迫作用就是改变水产动物的生存状态而对其产生压力的过程,包括有物理,化学以及生物等因子。胁迫作用下对虾生理活动、应激反应等都会发生改变,包括内源性酶活及肠道微生物,而这些变化与对虾死后货架期息息相关。目前,在水产养殖中,饥饿胁迫、微生物制剂、水环境中钙离子胁迫为几种主要的胁迫因子。本研究就是研究通过这三种胁迫作用,进而研究胁迫作用对对虾内源性蛋白酶、酚氧化酶(PPO)活的影响,以及利用变性梯度凝胶电泳(DGGE)指纹图谱检测不同处理下肠道微生物区系的变化,初步探讨胁迫作用下内源性保鲜机制。1、对虾在饥饿胁迫(0 (对照组),2, 4, 6 d)作用后冷冻猝死,4℃冷藏过程中,饥饿胁迫组的感官得分与对照组相比均有显著性差异(p<0.05);饥饿胁迫4 d实验组TVB-N值在冷藏第4d (control, 2ndd)达到25mg/100g (一级鲜度),第5d(control,4thd)达到30mg/100g (二级鲜度);而饥饿胁迫4d组细菌总数在冷藏第4d (control, 3rdd)才接近一级鲜度限值5.0lg (CFU/g)。综合分析,饥饿4d处理组比对照组对虾货架期延长约1.5 d。饥饿胁迫下对虾内源性蛋白酶活力先下降后上升,饥饿4 d处理组达到最小值,降低对虾机体内源性酶活约41.2%;饥饿胁迫6 d处理组出现蛋白酶活力上升现象。而饥饿胁迫对PPO活力的变化无显著性差异(p>0.05)。DGGE指纹图谱显示饥饿胁迫作用下6条条带光密度值随着饥饿时间的延长逐渐下降,也就是在肠道微生物菌群中这6种菌属随着饥饿处理时间的延长,数量逐渐减少。综合说明饥饿胁迫可以用于对虾内源保鲜,其作用机理一方面是通过抑制对虾内源性蛋白酶减缓对虾死后自溶腐败,另一方面是减少对虾内源性微生物数量,抑制微生物生理活动引起的腐败。2、对虾饲料中添加不同浓度抗菌肽APNT-6 (0mg/kg (AO)、50mg/kg (A1)、100mg/kg (A2)、150mg/kg (A3)、200mg/kg (A4))饲养对虾 3d 后冷冻猝死,4℃冷藏过程中实验组与对照组感官得分有显著性差异(p<0.05),A3实验组TVB-N值在第6d (control, 4thd)接近二级鲜度限值30mg/100g,细菌总数在冷藏期第6d(control,4thd)接近到6.0 lg (CFU/g)货架期终点。综合分析,A3实验组延长对虾货架期约2d。抗菌肽APNT-6对内源性蛋白酶活力有一定促进作用,实验组提高对虾内源性蛋白酶活力约11.7%,而实验组之间无显著差异性;对虾PPO活力随着抗菌肽浓度增加逐渐上升,在A3组达到一定限度,约提升PPO活力0.55倍。DGGE指纹图谱显示实验组条带数目减少7条,也就是APNT-6抑制了肠道微生物中7种菌属。说明抗菌肽APNT-6可用于对虾内源保鲜技术,其作用机理是通过抑制对虾内源性肠道微生物中优势腐败菌,减少对虾死后微生物作用导致的品质下降。APNT-6对蛋白酶、酚氧化酶均有不同程度的促进作用,对保鲜不利,但是在综合因素作用下延长对虾货架期约2d,说明对虾死后微生物的生理活动是对虾腐败的主要因素。3、水环境中不同钙离子浓度胁迫作用(191mg/L (1/2C组)、382mg/L (空白组 1C 组)、746mg/L (2C 组)、1529mg/L (4C 组)、3056mg/L (8C 组))养殖对虾3d后冷冻猝死,4℃冷藏过程中从感官得分结果来看,实验1/2C、1C、2C、和4C组均在冷藏第2 d就接近6分不可食用的限值,而8C组约在第3 d接近6分限值;8C实验组TVB-N值在第3d达到一级鲜度限值25mg/100g (control, 2ndd),第4d达到二级鲜度限值30mg/100g (control, 3rdd); 1/2C组、2C组、4C组与对照组1C组细菌总数变化差异性不明显,而8C细菌总数相比较其他实验组增加比较缓慢,8C组细菌总数达到货架期终点6.0 lg (CFU/g)在冷藏期第5 d (control,4thd)。综合分析,1/2C组、对照组1C组、2C组、4C组对虾在冷藏期间保鲜指标差异性不明显,8C组相比对照组延长对虾货架期约1 d。对虾内源性蛋白酶、酚氧化酶活力随着钙离子浓度的增加逐渐上升,与对照组比较,8C组提高蛋白酶活力约72.1%,PPO活力约为对照组0.4倍。DGGE指纹图谱显示8C组比对照组条带数目显著减少5条。综合分析,8C组延长对虾货架期约1d,其保鲜机理之一可能是高浓度钙离子抑制了对虾死后微生物生理活动导致的腐败变质而延长了货架期。