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目的:肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KPN)属于革兰阴性肠杆菌科细菌,近年来,由肺炎克雷伯菌导致的血流感染比例越来越高,已成为医院感染的重要问题,该菌常包含许多可移动元件,非常容易在同种细菌和异种细菌间相互捕获各种耐药基因,碳青霉烯类抗生素在所有非典型β-内酰胺类抗生素中具有抗菌谱最广、抗菌活性最强、对β-内酰胺类酶高度稳定性以及毒副作用低等特点,被赋予是用于治疗革兰阴性菌感染最坚固的屏障。然而,肺炎克雷伯菌在临床抗生素大量使用甚至过度使用的选择压力下,特别是对β-内酰胺类酶抗生素的广泛应用下,其耐药势头日趋恶化,出现了碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(Carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP),并且耐药率呈现出逐年递升趋势,CRKP引起的血流感染逐渐出现并广泛流行,这大大增加了感染控制的难度、降低了患者生存率,临床标本中分离出的肺炎克雷伯菌高位次数最多的标本为痰液及呼吸道分泌物如肺泡灌洗液,因此以往的研究大多数集中在呼吸道标本中肺炎克雷伯菌的耐药性方面,本研究对临床血流感染分离的CRKP的特征进行分析,以期为临床感染控制提供指导。方法:我们连续收集了2017.01至2017.12某三甲医院微生物室从不同病区血标本培养出的CRKP共32株,对所有菌株均应用法国梅里埃公司VITEK2-compact全自动细菌分析仪进行细菌鉴定及药敏试验,全部标本药敏试验所检测抗生素包括氨苄青霉素,氨苄西林/舒巴坦,哌拉西林/三唑巴坦,头孢唑林,头孢曲松,头孢替坦,头孢他啶,头孢吡肟,氨曲南,环丙沙星,左氧氟沙星,丁胺卡那霉素,庆大霉素,妥布霉素,亚胺培南,厄他培南,甲氧苄啶/磺胺甲噁唑(复方新诺明),同时对这32株应用微量肉汤稀释法测定替加环素的最低抑菌浓度(MIC)值,改良Hodge试验(MHT)检测碳青霉烯酶表型,通过荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法检测耐药基因,多位点序列分析(MLST)进行细菌同源性分析。结果:32株血流感染的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌对大多数抗生素具有较高的耐药率,丁胺卡那霉素(阿米卡星)耐药率43.8%,妥布霉素耐药率53.1%,庆大霉素耐药率59.4%,甲氧苄啶/磺胺甲噁唑(复方新诺明)耐药率68.8%,氨曲南耐药率93.8%,环丙沙星及左氧氟沙星耐药率均为96.9%,氨苄青霉素、头孢唑啉、头孢曲松、头孢他啶、头孢替坦、氨苄西林/舒巴坦、厄他培南、亚胺培南的耐药率均为100%,应用微量肉汤稀释法测定替加环素的最低抑菌浓度(MIC值),结果发现了1株替加环素中介的肺炎克雷伯菌,占3.13%,余31株对替加环素均敏感,占96.88%,提示血流感染的碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌对替加环素仍保持高度的敏感性。32株CRKP中有27株改良Hodge试验(MHT)阳性,阳性率为84.38%,以聚合酶链反应(PCR)结果为金标准,改良Hodge试验敏感性95.83%(23/24),应用配对资料卡方检验方法进行统计学比较,结果表明两种方法差异无统计学意义(P=0.375,即P>0.05)。荧光定量PCR检出耐药基因KPC-2 24株(75%),CTX-M922株(68.75%),CTX-M1 3株(9.38%),膜孔蛋白编码基因Ompk36缺失29株(90.63%),其中检携带有CTX-M9型耐药基因的22菌株均合并膜孔蛋白Ompk36缺失,膜孔蛋白编码基因Ompk37缺失2株(6.25%),未发现膜孔蛋白编码基因Ompk35缺失,未检出耐碳青霉烯酶耐药基因OXA48、IMP-4、NDM-1,多位点序列分析(MLST)ST11型25株(78.13%)。其余ST2894、ST1、ST2235、ST2230、ST1517、ST147、ST550各1株。其中24株携带KPC-2耐药基因的菌株有20株MLST分型为ST11型。结论:本院临床血流感染分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌主要耐药机制是携带耐药基因KPC-2、CTX-M9,同时主要伴有膜孔蛋白编码基因Ompk36缺失,序列型ST11型是全国范围内主要的流行序列型。本院血流感染的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌已经呈现了高度耐药性并且有流行的趋势,应引起临床重视。