目的从世界范围来看，在乳腺所发生的各种类型病变中乳腺癌是主要的致死原因，其发病率正逐年升高，现在在女性各种恶性肿瘤中已经排名第一位，并逐渐向年轻化发展，而且越是年轻的患者，其乳腺癌的病理类型往往提示侵袭性越高，预后也越差。因此，进一步深入的理解和研究乳腺癌的发生以及发展机理，对如何早期发现以及减少乳腺癌的发病率相关因素的影响，进而对提高乳腺癌患者的生存率、改善生活质量和降低发病率具有十分重要的意义。近年来大量研究表明乳腺癌的发生以及发展是多个基因共同起作用，经过多个步骤逐步导致的结果。尽管近年来乳腺癌的发病率不断增加，但是随着分子生物技术的进展以及分子标记物的发现等诊疗技术的进步，都为乳腺癌有效的靶向治疗提供了更多的可能性，因此对乳腺癌发生有关的易感基因及其相关基因产物的研究逐渐成为肿瘤学关注和深入探索的焦点问题，引起了众多学者的极大兴趣，同时也取得了很大成就。KLF（Krüppel-like factor）家族是真核生物中一大类基础转录因子（basictranscription element-binding protein，BTEB），是黑腹果蝇中含有锌指结构的一种具有特征性的转录因子，大量哺乳动物基因的DNA结合域都包含有类似的结构，因此与Krüppel均具有序列同源性。在结构上，和20世纪80年代早期发现的Sp1蛋白因子（specific protein1）家族具有高度的相似性，都具备一个由3个串联富含GC/GT的Cys2His2组成的羧基端，至少由16个各异的成分组成，并且根据该结构，我们可以划分出几个不同的亚型，在细胞分化、增殖、凋亡、血管的生成以及胚胎形成过程中发挥着重要的调节作用，同时很可能与乳腺癌的恶性程度、发生远处转移的几率以及患者预后有十分密切的关系，是一种最重要的真核生物中的基础调控因子。KLF4(Krüppel-likefactors4)是KLF家族的成员之一，在多种细胞的生长、增殖、分化及细胞重编程等多种生物学过程执行着重要功能，与多种肿瘤的发生、发展以及转归有关。KLF4在特定的组织中以细胞依赖的方式发挥抑癌作用或者致癌作用，在早期肠腺瘤、结肠腺瘤以及直肠、食管、膀胱、前列腺、头颈部等多种恶性肿瘤中均经研究证实存在着KLF4的表达量以及表达方式的改变。然而，KLF4表达下调并不一定发生在所有类型和组织来源的肿瘤中，例如在口腔癌中KLF4的特点却是表达量的增加，并且它在肿瘤细胞中的定位与肿瘤的侵袭性以及恶性程度紧密相联。乳腺癌的发生、发展及生物学行为是在多个分子信号通路的调控下发生的，而转录因子在调控这些通路的过程中充当了重要角色，有研究表明乳腺癌与真核锌指蛋白转录因子中关系最密切的是KLF4（即胃肠富集因子Krüppel样因子），然而目前现有的有关转录因子KLF4与乳腺癌之间关系的研究报道尚存在很大的争议。因此，研究在乳腺癌中转录因子KLF4的表达变化情况和趋势，这些变化对乳腺癌细胞生物学行为以及患者的预后和转归带来的影响，在乳腺癌形成过程中所发挥的作用以及分子机制，对进一步认识乳腺癌的发生、发展、分级、分期、及早发现以及临床治疗等众多方面都具有极其深远的影响。本课题通过采用（1）Western blot检测不同浓度及不同时间TNFα刺激下乳腺癌细胞中KLF4蛋白的表达情况；（2）采用流式细胞术技术检测刺激因子作用下乳腺癌细胞的周期以及凋亡的情况；（3）腺病毒载体介导KLF4过表达，采用DAPI染色技术检测稳定转染细胞的凋亡程度。旨在从细胞、分子水平上分析乳腺癌细胞中转录因子KLF4的表达与乳腺癌细胞凋亡的相关性，为更有效的治疗乳腺癌提供新的靶点。方法采用不同浓度TNFα（0、1、5、10、20ng/mL）相同作用时间（24小时）以及相同浓度（10ng/mL）不同时间（0、6、12、24、34小时）刺激SK-BR-3乳腺癌细胞，提取蛋白后应用Western印迹分析的方法检测KLF4的表达水平；应用流式细胞术和DAPI染色的方法分析不同浓度以及不同时间刺激因子作用下对乳腺癌细胞的作用以及质粒转染后乳腺癌细胞的凋亡情况，并对比加入刺激因子前后乳腺癌细胞形态学的改变以及凋亡情况。应用SPSS16.0统计软件进行处理，所有数据以均数±标准差（x±S.D.）表示。均数比较采用t检验或单因素方差分析（One-wayANOVA），以P＜0.05为差异有统计学意义。结果不同浓度TNFα（0、1、5、10、20ng/mL）刺激SK-BR-3乳腺癌细胞24小时后，随着刺激浓度的增高，KLF4表达水平呈剂量依赖性逐渐增多；相同浓度（10ng/mL）不同时间TNFα（0、６、１２、２４、３４小时）作用下的结果显示，随着对乳腺癌细胞刺激时间的增加，KLF4的表达水平以时间依赖性的方式逐渐递增；流式细胞术和DAPI染色显示，TNFα可以诱导SK-BR-3乳腺癌细胞的凋亡，并且随着刺激剂量和时间的增加，细胞核固缩程度显著加重，细胞凋亡程度明显提高；构建pAd-EGFP和pAd-EGFP-KLF4腺病毒表达载体，在SK-BR-3乳腺癌细胞中过表达EGFP或EGFP-KLF4，再给予TNFα刺激后，DAPI染色和流式细胞术观察结果经对比显示，KLF4过表达之后乳腺癌细胞核固缩程度较大，而且可以明显促进SK-BR-3乳腺癌细胞凋亡程度。结论TNFα可以诱导SK-BR-3乳腺癌细胞中KLF4表达，并且KLF4参与了TNFα诱导的SK-BR-3乳腺癌细胞凋亡过程。