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J亚群禽白血病(Avian leucosis Subgroup J)是由J亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus Subgroup J,ALV-J)引起的肿瘤性疾病。ALV-J感染可以导致机体的免疫抑制,严重危害养禽业的发展。迄今,尚仍无有效防治该病的的药物和疫苗。临床上仅通过淘汰阳性鸡来控制该病。因此,深入挖掘J亚群禽白血病的致病机制,研制抗J亚群禽白血病的疫苗刻不容缓。1、本研究应用Western Blot和激光共聚焦显微镜实验等方法对ALV-J对DF-1细胞自噬稳态水平做了检测,发现在ALV-J感染早期,DF-1细胞的自噬稳态水平持续下调。2、本研究用Western Blot技术分析ALV-J感染后自噬底物蛋白p62/SQSTM的表达,结果发现,相对于空白对照,ALV-J感染会造成p62/SQSTM蛋白的积累,表明ALV-J感染下调自噬稳态水平可能是由于阻断自噬的起始阶段造成的。3、本研究为了筛选病毒自噬相关蛋白,构建了ALV-J 9个基因的真核表达载体,应用Western Blot和激光共聚焦显微镜实验技术,检测了过表达ALV-J编码蛋白情况下的自噬的稳态水平。结果发现转染pRK5 flag-gp37组LC3的转化受到抑制,荧光的聚点也小于空载体组,表明ALV-J gp37蛋白可以下调自噬稳态水平。4、本研究为了筛选与ALV-J gp37相互作用的宿主蛋白质,在DF-1细胞中过表达了gp37蛋白,利用做Pull down和质谱分析方法,得到了潜在的五5个与gp37相互作用的宿主蛋白:T-complex 1(TCP-1)、Cyclin dependent kinase 1(CDK1)、Annexin A1(ANXA1)、Heat shock protein 60(HSP60)和LLP homolog,long-term(LLP)。5、本研究利用Western Blot和激光共聚焦免疫荧光的方法检测了5个潜在的ALV-J gp37蛋白互作蛋白(TCP-1、CDK1、ANAXA1、HSP60和LLP)对自噬稳态的影响。结果发现TCP-1显著下调了细胞的自噬稳态水平,表明TCP-1可以抑制细胞自噬;同时利用免疫沉淀技术验证ALV-J gp37和TCP-1互作关系,结果发现gp37与TCP-1在DF-1细胞中发生相互作用。6、本研究研制出自噬靶向核酸疫苗pVAXI-gp85-LC3B,结果发现该核酸疫苗可以诱导鸡产生抗体,并上调外周血中CD3~+CD8~+阳性T细胞的数量,诱导IL-2、IL-10和IFN-γ的表达,表明该核酸疫苗具有显著的效果。本研究深入探索了ALV-J抑制细胞自噬的分子机制,研制了抗ALV-J的自噬靶向核酸疫苗,研究结论对了解ALV-J的致病机制,控制ALV的爆发具有重要意义。