密码子优化的HPV16型L2E7融合基因的原核表达及其蛋白的免疫效果观察

来源 :中国疾病预防控制中心 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liongliong482
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本文的目的是提高L2E7融合蛋白在大肠杆菌中的表达量,为后期纯化打下良好基础,同时能降低HPV治疗性疫苗生产成本。本试验主要从密码子偏性等方面来进行优化从而期望提高L2E7融合蛋白在大肠杆菌中表达量,经密码子优化后的基因在大肠杆菌中得到高效表达,目的蛋白占全菌的60%左右。密码子优化后的蛋白进行了层析纯化。经纯化后的HPVl6 L2E7蛋白进行了体液免疫和细胞免疫效果的检测。ELISA结果显示免疫组小鼠血清中均检测到了HPV16 L2和HPV16 E7的抗体,而从免疫组来看,L2E7蛋白+CpG组的效果要好于单独蛋白组。ELISPOT结果显示无论是E7合成肽库刺激还是E7<,49-57>表位肽刺激,在分泌IFN-γ的效应T细胞数检测中,免疫组小鼠可以检测到较高的斑点数。抗肿瘤移植试验结果和治疗移植瘤实验结果显示,L2E7蛋白加CpG均能保护100%小鼠不成瘤,表明HPV16 L2E7蛋白有很好的肿瘤生长抑制效果和抗肿瘤移植效果。这些均表明密码子优化后基因不仅在大肠杆菌中有较高的表达量,且表达蛋白保持了好的免疫效果,本研究获得了一个HPV16L2E7治疗性疫苗的大肠杆菌优化高效表达菌株。
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