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背景及目的：心肌肥厚是多种心血管疾病的共同病理过程，也是心力衰竭的重要结构基础，尽管致心肌肥厚的各种刺激因素不同，但是心肌肥厚的机制则相似，即细胞体积增大、蛋白合成增加、胚胎型心脏基因表达上调。最近Olson等报道，钙调神经磷酸酶（Calcineurin，CaN）作为细胞内Ca2+敏感的信号物质，在心肌肥厚中起重要作用，其实验揭示心肌细胞内存在一条新的致心肌肥厚的信号传导通路，即CaN-NFAT3（活化T细胞核因子）信号传导通路，如给予环孢菌素A（CsA），可通过抑制CaN活性消除心肌肥厚及改善心衰。心肌细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)的变化主要受细胞外Ca2+跨膜内流及内贮Ca2+释放的调控，目前已认识到Ca2+是胞浆内重要的第二信使，是多条信号传导通路的共同交汇点。蛋白激酶C（PKC）、丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）参与心肌重构的信号转导已成为人们的共识。本研究以原代培养的新生大鼠心肌细胞为模型，Angiotension（AngⅡ）刺激心肌细胞外Ca2+内流和ryanodine（RY）刺激心肌细胞内贮Ca2+释放，明确不同来源的细胞Ca2+对其生长的影响，认识CaN信号通路在心肌细胞肥大中的发病学意义，阐明[Ca2+]i对PKC、MAPK活性、ERK1/2蛋白表达、早期即刻表达基因和胚心标志基因的影响。 方法：以原代培养的乳鼠心肌细胞为模型，AugⅡ刺激细胞Ca2+内流、RY刺激细胞内贮Ca2+释放；3H-TdR和3H-leu掺入法反映心肌细胞核酸和蛋白合成速率；Fura-2/AM比率荧光成像系统分析细胞内Ca2+信号变化；免疫细胞化学检测心肌细胞CaN、NFAT3、C-fos、C-myc蛋白分布；Westernblot半定量分析心肌细胞CaN、NFAT3、GATA4、ERK1/2、α-actin、C-fos、C-myc蛋白表达；RT-PCR半定量分析β-MHC mRNA表达；γ－32P标记底物测PKC、MAPK活性测定。 结果：主要研究结果如下： 1．Aug 11呈浓度依赖性（ 10‘～ 10”’mol／L）促心肌细胞 ［Ca’十］i增力，各刺激组［Cdh与对照组相比差异显著。RY呈浓度依赖性门”‘～10“mol／L)促心肌细胞Kahh增加，但RY在 10”’mol几水平时心肌细胞 K41i反而下降，与正常对照组相比差异显著，说明此时RY处于半失活状态。 2．Aug 11可使无血清培养新生大鼠心肌细胞勺毛eu掺入率随时间增加而增加，与对照组相比差异显著，且在10”‘～10－’mol／L范围内呈量效依赖关系；RY在 10”‘～10“ m＊／L时刺激心肌细胞勺毛eu掺入量增加呈量效依赖关系，但 10”’mol／L时降低。Aug 11可促进无血清培养新生大鼠心肌细胞’H－TdR掺入率，且在 10”’～10”’mol／L范围内呈量效依赖关系；RY在 10－‘～10－‘mol凡时，心肌细胞’H1dR掺入量增加呈量效依赖关系，10“’mol／L时则降低。应用CaN特异抑制剂CsA后观察到，CsA可抑制’H．Leu和‘H刊R掺入，且在50～20oUg几浓度范围内呈量效依赖关系。 3．CaN主要表达于正常心肌细胞胞浆，核膜周围亦可见明显表达，Aug 11、RY刺激 24 h时，CaN除表达于心肌细胞胞浆外，细胞核明显着色深染，核膜周围表达更明显。Aug 11、RY刺激心肌细胞 24 h、2 d时厂aN蛋白表达明显增加，各刺激组与对照组相比差异非常显著。 4．NFAT。表达于正常心肌细胞的胞浆及胞核，在Aug 11、RY＊”’mol／L)刺激 24 h时主要表达于心肌细胞核。Aug 11、RY刺激心肌细胞 24 h、2 d时，NFAT；蛋白表达明显增加，各刺激组与对照组相比差异非常显著。 5．CsA可明显抑帘 Aug 11（10”’mol／L）刺激的心肌细胞 CaN、NFAT。、GATA4表达增加。同样，CsA可明显抑制 RY （l”’mol／L）刺激的心肌细胞CaN、NFAT。、GATA。表达增力。 6．钉红（Ru） （ 0”’mol／L）阻断心肌细胞内＊”释放，能显著抑制 CaN蛋白表达，与对照组相比差异非常显著P＜0刀1＼硝苯唆（NI 门‘’OOI／L）刺激组CaN蛋白表达与对照组相比差异无显著性。 7．Aug 11、RY （ 0”’mol几）刺激心肌细胞 5 min时 MAPK活性明显增加，15 min时 MAPK活性增至最高水平，30 min时又下降，各刺激组与对照组相比差异非常显著。大鼠心肌细胞表达两种Eng蛋白同型体： ·Vll· ／ t”：。ERKI和 EngZ，其分子量为 42KD和 44KD。Aug 11、RY刺激心细胞 24 h时，ERKIo蛋白表达量明显高于对照组。Angll、RY刺激心肌细胞 5 min时 PKC活性明显增加，15、30 min时，PKC活性逐渐下降，各刺激组与对照组相比差异非常显著。 8．Angllllo”’mol儿帅激心肌细胞10 min时，c－pc、c－fos蛋白主要表达于胞浆；刺激 30 min时，c－myc、c－fOS蛋白主要?