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背景:食管鳞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)是一种人类常见疾病,是在内、外因素影响下发生的多基因表达失调的一种个体化疾病,严重威胁着人类生命健康。尽管近年来生存率有所提高,但中晚期食管癌5年存活率依然不超过20%。较早出现淋巴结转移、预后差是食管鳞癌的重要生物学特征,但其原因及机制目前仍不清楚。因此,寻找可以早期诊断和预后判断的食管鳞癌标志物迫在眉睫。近年来研究发现,miRNA不但参与了食管鳞癌的发生过程,还与食管鳞癌的侵袭和转移相关。随着对miRNA认识的深入,将进一步明确mi RNA在食管鳞癌中发挥的作用,为miRNA在食管鳞癌的发病机制、早期诊断、靶向治疗和预后判断等方面提供新的依据。然而肿瘤组织miRNA检测创伤大,并且在临床上无法实现肿瘤的早期诊断和治疗效果的适时监控。一些肿瘤患者血清miRNA表达谱呈现出特异性改变,相比组织miRNA而言,血清miRNA具有无创伤、可重复、同一时间检测多项指标等优点,其受外来干扰因素影响小,临床实用性强,有潜力作为一种有价值的肿瘤标志物。目的:观察血清miR-30d-5p在食管鳞癌患者术前术后与健康人群中的表达水平,探讨血清miR-30d-5p与患者临床病理学特征和预后的关系,比较血清miR-30d-5p与血清TK1表达差异。以期寻找食管鳞癌患者中高灵敏度和特异性的早期诊断和预后判断的基因标志物。研究方法:选取2013年4月-5月期间行手术治疗的30例原发性食管鳞癌患者的血清标本。通过微阵列芯片分析对比小样本(3例)食管鳞癌患者术前及术后血清miRNA的表达差异,筛选变化较大的miRNA。对筛选的miRNA进行初步实时定量荧光聚合酶链式反应(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)验证(9例患者),挑选新的潜在食管鳞癌肿瘤相关miRNA。扩大样本量,在27例食管鳞癌患者术前及术后血清中,用qRT-PCR对候选肿瘤微小RNA(onco-miRNA)在术前及术后的变化情况进行验证,并与对照组比较。对27例患者术前术后进行血清胸苷激酶1(serum thymidine kinase 1,STK1)检测,分析miRNA-30d-5p和TK1在食管癌患者各项临床病理特征中术前术后的表达,同时对miRNA-30d-5P和TK1的术前术后表达水平与患者预后进行Cox回归分析。寻找食管鳞癌预后相关的独立危险因素。结果:通过微阵列芯片分析对比小样本(3例)食管鳞癌患者术前及术后血清中miRNA的表达差异。共检测2555条miRNA,其中信号值≥500者共143条。筛选变化较大的miRNA,即术前/术后比值>2倍(log2比值>1)或者小于0.5倍(log2比值<-1)则认为具有显著性差异。对比3例食管鳞癌患者切除癌组织前后血清RNA寡核苷酸基因芯片杂交结果显示,21种miRNAs在食管鳞癌患者切除癌组织前后相比存在明显差异表达。18个表达下调的miRNAs和3个表达上调的mi RNAs。再将芯片数据导入Cluster 3.0进行聚类分析。结合国内外文献,挑选变化最明显的两条miRNA为术后显著下调的miR-30d-5p和术后显著上调的miR-483-5p作进一步RT-PCR验证。qRT-PCR验证结果显示miR-483-5p术前及术后变化无显著差异(P>0.05),而miR-30d-5p术前术后变化趋势与芯片一致,且变化具有差异(P=0.05),因此挑选miR-30d-5p作为新的潜在食管鳞癌miRNA。在27例食管鳞癌患者中,用qRT-PCR对血清miR-30d-5p在术前及术后的变化情况进行验证,血清miR-30d-5p在术前及术后变化具有统计学意义(P<0.05),且食管鳞癌患者术前的miR-30d-5p表达水平显著高于健康对照组(P<0.05)。食管鳞癌患者血清miR-30d-5p的术前术后的表达水平与食管鳞状细胞癌患者的肿瘤的浸润深度、淋巴结转移、位置及长度、病理类型、分化程度、吸烟饮酒史等临床病理特征等均有关(P<0.05),同时,血清胸苷激酶1(thymidine kinase 1,TK1)术前术后的表达水平与食管鳞状细胞癌患者的肿瘤的浸润深度、肿瘤病理类型及分化程度、吸烟饮酒史等临床病理特征有关(P<0.05),两种检测方法对患者的术前术后的差异均具有统计学意义(P<0.05),且血清中miR-30d-5p改变情况好于TK1。研究组与对照组的miR-30d-5p表达水平有明显差异(P<0.05),miR-30d-5p低表达的患者有更长的无病生存间期(Disease Free Interval,DFI)、总生存期(Overall Survival,OS)。单因素分析显示,血清中miR-30d-5p的低表达的患者有更长的无病生存间期、总生存期。结论:miR-30d-5p具有食管鳞癌肿瘤标志物的潜能,在食管癌患者中的高表达可能对食管癌的发生发展有一定的促进作用,且预示预后不良。血清miR-30d-5p可用于早期诊断并判断预后,可能比血清TK1更灵敏。