足螨是家畜和野生动物常见的一类体外寄生虫,呈世界性分布,可引起宿主动物发生顽固性、接触传染性皮肤病。大熊猫是我国的国宝,熊猫足螨病是大熊猫常见的体外寄生虫病,对大熊猫的危害极大。长期以来,动物足螨病的防治均以药物杀螨为主,但杀螨药物均不同程度地存在副作用且长期使用可能产生抗药性以及造成环境污染等问题,因此需要进行防治新技术的研究。目前有关动物足螨病的免疫防治,尚无研究报道。本研究从大熊猫体表采集分离出熊猫足螨,参考GenBank中收录的德州足螨副肌球蛋白基因和绵羊痒螨副肌球蛋白基因序列设计引物,通过PCR扩增与克隆后测序得到了2628bp的副肌球蛋白全基因序列(登录号为EU543652)。通过对该基因核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行分析,结果表明熊猫足螨副肌球蛋白基因核苷酸序列与德州足螨和绵羊痒螨序列同源性最高,分别为98.4%和95.9%,其次与欧洲尘螨分离株的同源性较高为90.8%,与疥螨的序列同源性范围为81.3%～84.3%,而与美洲尘螨分离株部分序列同源性较低仅为71.1%;而它们的氨基酸序列的同源性较高,均在95%以上,其中与德州足螨和绵羊痒螨的同源性最高,分别达到99.8%和98.6%。该基因编码了一个有875个氨基酸的多肽,该蛋白分子量为102.581kDa,理论等电点值为pI=5.57,具有较强的亲水性,蛋白抗原性分析显示其抗原位点分布于整个蛋白质多肽链,有40个T淋巴细胞抗原决定簇位点,不存在跨膜结构域,是一种膜外蛋白。将目的片断插入pET32a(+)表达载体上,并将鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用1.0mM/L的IPTG诱导表达了熊猫足螨副肌球蛋白,SDS—PAGE分析表明,在相对分子质量约122kDa处有明显的蛋白质表达条带,该蛋白在7h时基本达到表达量最大值,而IPTG浓度在0.5mM/L、1.0mM/L和2.0mM/L之间没有明显表达差异,均都得到了很好的表达。同时采用兔疥螨阳性血清为一抗进行免疫印迹反应,结果发现重组载体菌表达产物可与兔疥螨阳性血清反应出现蛋白免疫印迹带,由此说明该蛋白与兔疥螨副肌球蛋白为同源蛋白,具有交叉反应。