黑色素瘤是一种来源于黑色素细胞的恶性皮肤癌症，其具有发病率低，致死率高等特点。目前，临床上主要还是通过化疗和放疗治疗黑色素瘤。近年来有多种免疫疗法引入黑素瘤治疗，包括疫苗疗法、过继回输 T细胞疗法、细胞因子与靶标药物疗法等等。其中过继回输T细胞疗法治疗黑色素瘤已在临床上得到应用，过继回输T细胞疗法是指从肿瘤组织中获取肿瘤浸润淋巴细胞，然后将细胞回输到病人体内进行治疗。但是这种获得细胞的方法成本较高，迫切需要一种合适的的能够在体外获得大量的肿瘤特异性的细胞毒性T淋巴细胞的方法。在肿瘤微环境中存在大量的具有免疫抑制性的细胞与细胞因子，它们会抑制体外回输的细胞毒性T细胞使其无法进入肿瘤中发挥治疗作用，导致单纯的细胞回输治疗肿瘤效果不明显。需要将免疫疗法与化疗方法相结合，在回输细胞前先用化疗药物降低肿瘤微环境的免疫抑制作用，从而增强治疗黑色素瘤的效果。　　本课题是使用B16肿瘤细胞裂解液作为抗原，在体外通过低剂量的细胞因子IL-2与肿瘤细胞裂解抗原刺激脾脏细胞激活，使用该方法在体外培养脾脏细胞4-5天，即可以获得由脾脏细胞增殖来的大量具有肿瘤特异性杀伤效应的细胞毒性 T细胞。通过流式细胞术检测激活的T细胞对肿瘤细胞的杀伤效率，发现当效靶细胞比例50:1的时候，杀伤效率就可以达到60％。同时对脾脏细胞具有较低的杀伤效率，证明这种方法获得激活的T细胞具有很好的肿瘤特异性杀伤效应。　　将体外激活的T细胞与环磷酰胺化疗药物联合治疗黑色素瘤，低剂量的环磷酰胺可以剔除免疫抑制性调节性T细胞，本课题选用150mg/kg的环磷酰胺给药浓度。确定联合治疗实验方案，联合治疗组得到较好的治疗效果，同时该治疗方案可以应用于活体成像方法，观察到回输的T细胞很好的进入肿瘤区域。