【摘 要】
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腺相关病毒(adeno-associated virus，AAV)是基因治疗的良好载体，特别是人AAV载体，因能将目的基因定点整合至人19号染色体的AAVSl部位所以格外引起人们的兴趣。禽腺联病毒(avian
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腺相关病毒(adeno-associated virus，AAV)是基因治疗的良好载体，特别是人AAV载体，因能将目的基因定点整合至人19号染色体的AAVSl部位所以格外引起人们的兴趣。禽腺联病毒(avian adeno-associated virus，AAAV)与人AAV具有类似的潜伏感染特性和基因组结构，提示具有定点整合外源基因的可能。为了探索AAAV的反向末端重复序列(ITR)和Rep基因序列能否促进外源基因的整合和表达，本研究将人溶菌酶(hLYZ)鸡输卵管特异表达盒克隆在AAAV的两个ITR之间，并将CMV启动子控制的Rep基因表达盒克隆入相同载体，获得重组表达载体pRep2ITR-OV4-IYZ。以不含AAAV基因序列的鸡输卵管表达载体pOV4-LYZ为对照，经翅静脉注射产蛋鸡，注射剂量均为10<14>拷贝，隔天重复注射一次。载体注射鸡蛋清中的重组酶活性检测结果显示，重组载体pRep2ITR-OV4-LYZ表达的hLYZ水平和表达维持时间优于pOV4-LYZ。用重组载体pRep2ITR-OV4-LYZ连续3次注射产蛋鸡，结果显示连续3次载体注射的重组酶表达量和时间略优于连续两次注射。这些试验结果提示，上述AAAV基因序列对重组载体的细胞转染或外源基因整合具有一定的促进作用，但不足以显著延长外源基因的表达。
为了探索用鸡输卵管表达的重组人溶菌酶防治鱼细菌性疾病的可行性，用直接结晶法提纯鸡蛋清中的溶菌酶，经SDS-PAGE分析证明提取的溶菌酶纯度较高，用纯化的重组人溶菌酶进行鱼类细菌和奶牛乳房炎致病菌体外抑菌试验，结果发现重组人溶菌酶对牛乳房炎致病菌具有很好的抑制作用，而对鱼类细菌的抑制作用不理想。用喷雾干燥法制备含重组人溶菌酶蛋清粉，结果发现喷雾干燥对重组人溶菌酶活性无显著影响。
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