本文以不同月龄组Wistar大鼠作为动物增龄模型，观察增龄过程中胰岛β细胞功能的变化以及胰岛β细胞增殖、凋亡、自噬、Annexin1蛋白表达的差异。在体内实验结果的基础上，体外通过抑制及增强MIN6细胞内Annexin1蛋白的表达，探讨Annexin1对增龄相关的胰岛β细胞增殖、凋亡及自噬功能的影响及相关机制。第一部分增龄对大鼠胰岛β细胞胰岛素分泌的影响研究对象选取4月龄、14月龄和24月龄的雄性wistar大鼠，分别代表青年组、中年组和老年组。观察三组大鼠胰岛的衰老指标和胰岛β细胞功能的变化。结果：①衰老指标：大鼠胰岛内衰老相关蛋白p16的表达随大鼠月龄增加而增多（p<0.05）。②β细胞功能应用体内口服葡萄糖耐量试验（OGTT）和不同糖浓度刺激体外分离大鼠胰岛胰岛素释放试验（GSIR）来进行验证。OGTT结果显示：与青年大鼠相比，中、老年大鼠血糖达峰时间延长，OGTT2h血糖增高，AUCg增加；FINS水平随月龄逐步升高（p<0.01）。葡萄糖刺激后，与青年组相比，老年组出现胰岛素达峰时间延迟，ΔI10/ΔG10降低， AUCi增加（p<0.05）。GSIR结果显示：随大鼠月龄增加，胰岛β细胞葡萄糖刺激胰岛素释放指数（GSIR index）下降（p<0.05）。以上结果显示大鼠胰岛随增龄逐渐衰老，随着月龄的增加，大鼠糖耐量减低，胰岛β细胞分泌胰岛素能力下降。第二部分增龄对大鼠胰岛β细胞增殖、凋亡和自噬的影响研究对象同上。观察胰岛β细胞增殖、凋亡和胰岛自噬的改变。结果：①免疫组化结果显示，随着大鼠月龄增加，TUNEL阳性比例增多，胰岛素和PCNA染色阳性比例减少。提示胰岛素β细胞随月龄增加，细胞增殖减少，凋亡增加；②应用Western blot结果显示：随大鼠月龄增加，胰岛内LC3表达、LC3II/I比值以及Atg7蛋白表达逐渐降低，而p62及polyUB表达升高（p<0.05）；青年大鼠胰腺内Beclin-1/Atg6表达量较少，中年后明显增多，但在老年组表达量又出现降低趋势。提示随着大鼠月龄增加，胰岛自噬功能下降。第三部分Annexin I调控胰岛β细胞增殖和自噬的机制研究研究3组大鼠胰腺内Annexin1蛋白表达差异。以MIN6细胞为模型，通过抵制与增强细胞内Annexin1蛋白的表达，利用CCK-8技术观察细胞增殖活性改变，利用western blot技术分析细胞周期相关蛋白及蛋白激酶表达变化，同时观察此过程中PI3K-Akt-mTOR信号通路的变化；观察凋亡相关蛋白以及自噬相关蛋白LC3/Atg8及p62表达。结果：①免疫组化结果显示：随大鼠月龄增加，胰岛内Annexin1表达逐渐减少。②通过调控细胞内Annexin1蛋白表达发现，Annexin1可促进β细胞增殖；与cyclin D1、cyclinE、CDK2表达及PI3K-Akt-mTOR信号通路的活性正相关；而凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白表达无明显变化；在自噬方面，Annexin1与β细胞内LC3II表达、LC3II/I比值呈正相关，而与p62表达呈负相关（p<0.05）。实验结果提示大鼠胰岛内Annexin1表达具有年龄依赖性，且Annexin1蛋白可能通过调控细胞周期相关蛋白及蛋白激酶、激活PI3K/Akt/mTOR信号通路来促进β细胞增殖，可增强胰岛的自噬功能。但与β细胞的凋亡可能无相关性。综上所述，增龄过程中大鼠胰岛素分泌减少，可能涉及的机制有胰岛β细胞量减少、胰岛β细胞功能降低。随增龄胰岛β细胞增殖能力减弱、凋亡增加可能是导致数量减少的主要原因；胰岛β细胞自噬减弱，清除降解损伤细胞器的能力下降，则可能是胰岛β细胞功能降低的原因之一。Annexin1是生物体内发挥多种功能的蛋白之一，其在胰岛β细胞增殖、自噬功能中发挥了重要的作用， Annexin1表达随月龄减少，引发胰岛素β细胞增殖、自噬功能发生改变，部分解释了老龄体内胰岛素下降的原因。