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对虾白斑综合症病毒（WSSV）自从1992年首次发现至今已在养虾业造成巨大损失。尚未见存在商业化的防治WSSV药物。至今对WSSV的防治手段主要是加强环境管理、筛选无病毒虾苗和选育抵抗力强的品种等。近15年来,已证明WSSV囊膜结构蛋白VP28在病毒感染细胞的过程中起关键作用。对虾摄入VP28后对虾的抵抗WSSV能力增强。我们研究团队已报导的对虾幼苗口服转vp28基因鱼腥藻后,再用WSSV攻毒表现出了对WSSV的抵抗力（成活率高达68-83%）。目前我们转vp28基因工程鱼腥藻的研发已经进入中试阶段。转基因鱼腥藻显示了它的一些优势,但仍然存在三方面制约工程藻效果和产量的因素:1)转基因鱼腥藻中vp28基因表达量较低,生长较慢;2)光反应器培养有待改进,以提高产品生产效率;3)生产过程还是有杂菌杂藻干扰。为此,本文从三方面做了探索,并取得以下结果:1.构建了生长更迅速vp28表达效率更高的转基因集胞藻6803:为了提高生物量,加快生长速度,减短生产周期。我们需要重新考虑vp28基因的宿主系统。集胞藻6803（Synechococcus sp.PCC6803）的优势有:1)单细胞,结构简单;2)遗传上既可以用三亲接合转化法又可以用更简便的自然转化法;3)适应性强,是首先完成基因组测序的光合生物。本研究从Genbank中查得vp28基因的序列,让公司全合成。然后用质粒p RL489连接目的基因vp28,构建了穿梭表达载体。然后转入大肠杆菌扩增。通过三亲接合转移法或自然转化法得到转vp28基因的集胞藻6803。2.测定集胞藻的生长条件,以及vp28基因的表达:转入外源基因的工程藻在生理生化上与野生型藻种相差较大。本文从生理生化两个方面来探索工程藻生长需求和基因的表达峰值,从而调整生产条件(350-400μmol·m-2·s-2间,最适温度上调至35±5℃,最适pH=7.5-8.0)达到效益最大化通过氧电极检测不同条件下的净光合找到工程藻的最适生长条件。用实时荧光定量PCR检测到vp28基因最佳生长条件下工程藻不同时期中vp28的基因表达是对数生长期表达率最低稳定期最高。情况来分析基因表达的峰值,从而确定采收的时间为12-15天。在测定其表达的同时发现集胞藻的基因表达效率优于现阶段使用的鱼腥藻。3.纯化藻种,减少杂菌杂藻干扰规模化生产转基因蓝藻由于涉及人员多,生产环节复杂,增加了藻种受杂菌杂藻污染的机会。这会造成多种不利影响:（1）受到杂菌杂藻的干扰培养液p H会变酸,藻细胞变黄,生长慢（2）不纯的转基因藻液混有杂质杂藻稀释转基因藻对产品的加工使工艺更复杂繁琐并使质量变差。（3）含杂菌杂藻的产品降低药效还会产生毒副作用。转基因藻种在形态上难以与野生藻区分,在生理生化上又难以和含转空载体的品系区分,所以需要从生理、生化和分子三个层面来分离这三种亚品系。过去报道的研究通常是从不同形态的物种中分离出所需的野生型藻种,而尚未见从相同形态的藻体中分离出转基因藻和野生藻种的报道,更未见转基因品系和转空载体品系纯化的报道,我们在本研究中开始做些探索。本研究中,以转WSSV病毒vp-28的鱼腥藻7120（Anabaena sp.PCC 7120）为例,探讨转基因蓝藻纯化的方法。首先从传统的划板/涂布法来获得单藻落开始,进而需要利用荧光定量PCR、电泳、Western Blot等分子生物学手段来鉴定以及分离转基因藻和野生藻,最终达到分离三种不同亚品系的目的。研究中发现转基因集胞藻6803相对于野生型集胞藻表现出了对极端环境更强的适应性,尚需进一步做研究。本文中虽构建了转vp28基因的集胞藻6803但是对其抵抗WSSV病毒的效果尚未检测,望之后的研究中能对该藻进行大规模生产的试验并进行药效检测。