研究背景：多发性骨髓瘤是以产生单克隆免疫球蛋白为特征的恶性浆细胞疾 病，其发生的分子机制不清。最近，国外学者发现大多数骨髓瘤细胞中有免疫球蛋 自重链基因（IgH）的易位。通过IgH易位，原癌基因部分或全部拼接到IgH位点上而 表达失控，最终促使肿瘤发生。与IgH易位相关的基因近半数已被克隆，还有更多 的基因及其功能有待阐明。 与欧美相比，中国人多发性骨髓瘤有其本身所固有的临床特点，其遗传学背 景也不相同。文献中亦无有关研究报道。我们希望通过对中国人骨髓瘤细胞系KM3 基因组中IgH易位的研究，为探讨中国人骨髓瘤IgH易位的研究及阐明中国人与欧 美骨髓瘤患者染色体异常发生机制的差异奠定基础。 实验方法：根据文献报道，我们设计了5对引物，以地高辛标记的dUTP混合 物为底物，应用PCR方法合成能与IgH备转换区上、下游特异性结合的5对探针， 即。σμ／σδ6、Sμ、Sγ、Sα、Sε的 3’端和 5’端探针。将合成的探针进行电泳， 根据电泳的位置计算探针的大小，并与文献报道的探针长度比较，确定是否为所需 要的探针。 以己知浓度的地高辛标记的DNA作为对照，用斑点印迹法检测合成探针的地 高辛标记率。 为使Southrm印迹杂交顺利进行，各探针预先与胎盘基因组DNA进行斑点印 迹杂交，以确定所用DNA的含量。 应用Southrn印迹法，结合以上5对地高辛标记的探针，鉴定分别由限制性内 切酶 Hind III、Bgl II、Sph I 酶切KM3基因组DNA及胎盘基因组DNA正常、异 常重组片段。胎盘基因组DNA作为IgH基因胚系排列的正常对照。各酶酶切位点均 位于各S区外的两侧碱基序列。不同的IgH重组类型表现为不同的探针杂交模式。 只与一个探针杂交的片段为异常重组片段，且为 IgH易位所致，IgH断裂点在该探 针相对应的S区。 实验结果：1．各探针电泳的位置及片段的长度均与文献报道一致。2．探针3’S σμ地高辛标记率为 0．1pg／μl，其他各探针地高辛标记率均为 0．01 Pg／μl。3．各 探针与胎盘基因组DNA斑点印迹杂交均有杂交信号。4．Southern印迹杂交显示：细 、＿＿一 一 胞系 KM3中，10Kb大小的 Hind Ill片段同时与 5’S V、38 p两个探针杂交，且与 胎盘基因组保持一致，而5．6m的mud HI片段只与探针T5p探针杂交；5SY、 5它 e探针与KM3基因组的杂交片段与胎盘基因组基本保持一致；其他探针未显示杂 交条带。 结论：1．合成的地高辛标记的5对探针均为实验设计所要求的探针。2．骨髓瘤 细胞系 KM3基因组 DNA发生了 IgH易位，IgH断裂点在 S 11区。其伙伴染色体及 断裂位点有待进一步检测。