【摘 要】
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本文在芽殖酵母Saccharomycescerevisiae中共表达了GST融合的酵母端粒酶的蛋白催化亚基Est2p和RNA亚基T1c1，重建了端粒酶的活性。我们用硫酸铵沉淀分级分离和亲和纯化方法
【出 处】
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中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院
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本文在芽殖酵母Saccharomycescerevisiae中共表达了GST融合的酵母端粒酶的蛋白催化亚基Est2p和RNA亚基T1c1，重建了端粒酶的活性。我们用硫酸铵沉淀分级分离和亲和纯化方法部分纯化了GST-Est2p/Tlc1复合体。通过质谱和Western杂交鉴定，这个纯化的复合体不包含内源的端粒酶全酶的另外两个亚基：Est1p和Est3p。纯化的Est2p/Tlc1复合体在体外可以特异地有进行性地把核苷酸掺入到单链的TG1-3重复的引物上，但不能转位启动第二轮端粒重复序列的合成。当引物匹配在Tlc1模板区的不同位置时，纯化的核心酶显示出不同的活性。我们建立的纯化和重建端粒酶核心酶的方法，可以用来进一步研究端粒酶全酶的其它亚基及其调控蛋白的调控机制。
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