杜仲是落叶多年生乔木,以皮入药,是我国特有的名贵滋补药材,具有降血压、降血糖、抗氧化、抗肿瘤和利尿等多种药效。京尼平苷是杜仲的主要活性成分,但京尼平苷必须通过肠内细菌转化成京尼平,才能被人体吸收进而发挥其优异的降血压和降血糖药效。因此,利用体外转化法制备杜仲叶中的京尼平,可以提高药物的治疗效果。本文采用磁性Fe304壳聚糖(Fe3O4/CS)固定β-葡萄糖苷酶在体外将京尼平苷水解转化为京尼平,此外,我们首次对京尼平苷和京尼平对大鼠主动脉的舒张作用进行了比较研究,为京尼平苷和京尼平治疗心血管系统疾病提供理论依据。本论文的主要研究内容及结果如下:1.磁性Fe3O4/壳聚糖(Fe3O4/CS)纳米微粒制备工艺研究及表征。首先对制备磁性Fe304纳米微粒条件进行了优化,最佳条件如下为Fe2+:Fe3+=5:1,总铁浓度0.05 mol/L,pH值1 1。同时,我们对制备好的磁性Fe304纳米微粒和Fe3O4/CS纳米微粒,从X-射线衍射、红外、激光粒径等方面进行了表征。2.磁性Fe3O4/CS固定化β-葡萄糖苷酶水解京尼平苷研究。首先应用磁性Fe304/CS固定化β-葡萄糖苷酶,并确定最优固定化条件为温度50℃、pH值5.0、时间3.5 h。之后我们对Fe3O4/CS固定化β-葡萄糖苷酶水解京尼平苷为京尼平的工艺条件进行了研究,确定了最佳水解条件为时间6 h、pH值5.0、温度50℃C,在此条件下京尼平苷水解率和转化率可达到90%和96.80%。采用Fe3O4/CS固定的β-葡萄糖苷酶使用次数至少为8次,且活力保持50%以上。实验结果表明本固定方法使β-葡萄糖苷酶的稳定性提高,易从反应系统中分离和控制,可以多次反复使用,降低成本。3.京尼平苷和京尼平对大鼠胸主动脉血管舒张作用的比较研究。本实验采用离体血管张力记录法,观察京尼平苷和京尼平对去肾上腺素(NE,1×10-6mol/L)和氯化钾(KCl,30 mmol/L)诱发大鼠离体胸主动脉血管环收缩的影响,同时观察不同工具药物对其作用的影响及京尼平苷和京尼平对血管环依赖外钙性收缩和内钙性收缩的影响。实验结果如下:(1)同浓度梯度(1 ×10-8 mol/L-1 ×10-4 mol/L)的京尼平苷和京尼平对静息状态下的血管不产生舒张作用。(2)同浓度梯度(1×10-8 mol/L-1×10-4 mol/L)的京尼平苷和京尼平对NE(1×10-6mol/L)或KCl(30mmol/L)诱发的血管收缩可产生浓度依赖性的舒张作用。(3)同浓度梯度(1×10-8 mol/L-1×10-4 mol/L)的京尼平苷和京尼平对NE(1×10-6 mol/L)引起的去内皮的血管环张力变化也有浓度依赖性的舒张作用,但明显弱于对内皮完整血管环的舒张作用。(4)在NE(1 ×10-6 mol/L)预收缩的血管环上,加入L-NAME(1×10-4 mol/L)后,同浓度梯度(1×10-8mol/L1×10-4mol/L)的京尼平苷和京尼平的舒张血管作用减弱。(5)在NE(1×10-6 mol/L)预收缩的血管环上,加入吲哚美辛(1 ×10-5mol/L)后,同浓度梯度(1×10-8mol/L-1×10-4 mol/L)的京尼平苷和京尼平的舒张血管作用减弱。(6)在NE(1×10-6 mol/L)预收缩的血管环上,加入K+通道阻断剂四乙胺(1×10-2 mol/L)、4-氨基吡啶(1×10-3 mol/L)和格列苯脲(1×10-3 mol/L)后,同浓度梯度(1×10-8 mol/L-1 ×10-4 mol/L)的京尼平苷和京尼平的舒张血管作用未见影响。(7)在无Ca2+的K-H液中,分别用同浓度(3×10-4 mol/L)的京尼平苷和京尼平预孵后,加入NE(1×10-6 mol/L)后,可见到一短暂的收缩,继续加入CaC12(2.5 mmol/L),可见血管环出现收缩。与溶剂预孵组对比,同浓度(3×104 mol/L)的京尼平苷和京尼平可以明显减弱NE和CaCl2收缩血管的作用。综上所述,京尼平苷和京尼平的舒张作用可能与血管环细胞膜上VDC和ROC通道相关,可通过控制外钙内流和内钙来舒张血管环,还具有内皮依赖性,舒张作用可能与内皮产生的NO及PGI2有关;在舒张血管方面京尼平苷和京尼平的机制相同,但京尼平的舒张血管作用强于京尼平苷。