基因枪介导法将叶片衰老延缓基因P—IPT导入小麦品种的研究

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liongliong445
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叶片是小麦进行光合作用的重要器官,其衰老引起的叶片同化功能减退限制了小麦产量潜力的发挥。细胞分裂素具有延缓植物细胞和组织衰老的特性,随着细胞分裂素合成相关基因的克隆成功,Gan和Areasino构建了叶片衰老抑制基因PSAG12-IPT,为利用基因转化的方法改良小麦叶片早衰现象提供了可能。本试验对利用基因枪法将叶片衰老抑制基因PSAG2-IPT导入普通小麦品种小偃22和宁春16进行了研究。主要研究如下: 1、幼胚和成熟胚的愈伤组织诱导率无明显差异,但较高浓度的2,4-D有利于成熟胚的诱导,而幼胚培养时2,4-D浓度的影响效果因品种而异;两种外植体分化率的高低与KT/IAA的配比均有密切关系,但高浓度的激素水平不利于成熟胚的分化;诱导培养基中低浓度的2,4-D有利于所诱导的愈伤组织的分化。各种培养基处理与品种间都存在显著的互作效应,小偃22成熟胚培养的最佳培养基组合为MSD+3.Omg/L 2,4-D和MSD+0.5mg/L IAA+1.Omg/L KT,幼胚培养为MSD+4.0mg/L 2,4-D和MSD+0.5mg/L IAA+1.Omg/L KT;宁春16成熟胚培养为MSD+4.0mg/L 2,4-D和MSD+1.0mg/L IAA+1.0mg/L KT,幼胚培养时为MSD+1.Omg/L2,4-D和MSD+2.0mg/L IAA+2.0mg/L KT。两种外植体中幼胚的植株再生效率高于成熟胚,更适合基因枪转化的要求。 2、基因枪轰击时金粉用量会明显影响小麦幼胚的再生能力。金粉用量在0~250ug/枪范围内时对幼胚的再生无明显影响,但在400~600tug/枪时,幼胚再生能力随金粉用量的增大而减小;金粉用量对愈伤组织再生能力的影响因小麦基因型不同有差异,对宁春16愈伤组织的再生无影响,而600ug/枪显著降低小偃22的再生频率。 3、不同金粉用量会影响遗传转化效率。适宜金粉用量为120~250ug/枪;愈伤组织作为转化受体时,250ug/枪金粉用量的转化率达到了2.5%,显著高于其它用量。 4、小麦愈伤组织更适宜作遗传转化受体。幼胚的转化率为0.39%,愈伤组织的转化率为0.75%。同时宁春16表现出更强的接受外源基因的能力。愈伤组织的最佳轰击参数为:1ug DNA/枪、250ug金粉/枪、轰击气压1100psi、轰击距离9cm。 5、潮霉素适合用来进行转化体的筛选,并建立了宁春16的有效的筛选系统,在继代培养基中添加80mg/L的潮霉素能有效的去除非转化愈伤组织,达到筛选的目的。 6、首次利用基因枪介导法将叶片衰老延缓基因PSAG12-IPT导入宁春16和小偃22小麦品种,并通过PCR检测获得11株阳性植株,其中,小偃22阳性植株2株,宁春16阳性植株9株。总转化效率为0.611%,其中,宁春16的的转化率为1%,小偃22的转化率为0.222%。
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