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本文对胰岛素基因增强结合蛋白诱导神经干细胞向胆碱能神经元分化进行了研究。具体内容如下：
1.从孕14天大鼠胎脑中获得NSC，在DMEM/F12(1∶1)无血清培养液中培养，培养的过程添加B27、EGF与bFGF。待形成神经球并长满培养瓶后将原代培养得到的NSC利用Dispase消化成单细胞，传代得到克隆的NSC。行抗Nestin、Musashi免疫组化进行鉴定，结果Nestin、Musashi染色均为阳性，证明获得的细胞为神经干细胞。将得到的单细胞用流式细胞仪检测Musashi阳性细胞的比例，结果96％的细胞均为阳性，证明获得的NSC纯度较高。
2.利用运动神经元特异性表达乙酰胆碱酯酶的特点，观察NGF是否有诱导NSC向运动神经元分化的趋势。在实验中用不同浓度NGF诱导神经干细胞分化，并用10％血清组作为对照，行ChAT免疫细胞化学染色，统计学分析结果显示25，50，100，200ng/mlNGF组乙酰胆碱阳性细胞数明显比对照组增加，且以100ng/ml组最为明显。同时发现NGF诱导组分化细胞的突起明显增粗，且明显比对照组伸长，以200ng/ml组最为明显。此实验结果证明NGF有诱导NSC向胆碱能神经元分化的能力，且以100ng/ml剂量最为明显。NGF诱导组分化细胞的突起明显比对照组增粗、增长，说明NGF不但能促进成熟神经元轴突的延长，同时也能促进新生神经元突起的延长。
3.NSC加入到骨骼肌培养体系后很快贴壁，24h从神经球内长出许多突起，并有细胞从神经球内迁移出，细胞状态良好。3天后，可见分化的神经干细胞突起增长，且有分支，7日后可见细胞突起互相连接，并可见细胞分化成神经元样结构。将共培养10d生长状态良好的骨骼肌细胞与NSC在JSM-5600LV型扫描电镜下观察，发现NSC未分化时细胞表面有许多泡状的结构，随着其成熟度的增加，胞体发出突起并逐渐增长，而泡状结构逐渐消失；可见培养的骨骼肌细胞表面有刚分化及已分化的NSC附着；在分化的细胞突起与胞体及其与骨骼肌细胞之间形成连接。间接地证明分化的细胞可能是有功能的。
4.利用RT-PCR方法，从新生大鼠脊髓中获取Isl-1基因的cDNA序列，与PGEM-T(TA)载体相连、测序，获得Isl-1基因的cDNA序列。将Isl-1基因与pLEGFP-C1逆转录病毒载体进行重组。将重组病毒载体与空载体分别利用质脂体转染包装细胞PA317，并证明在PA317细胞内有Isl-1基因的mRNA的表达。用含有重组病毒载体的上清转导NSC，证明转导Isl-1基因的NSC有Isl-1基因的蛋白表达。将转入Isl-1基因的NSC、转入空载体的NSC在体外进行诱导分化，两组分别行抗ChAT免疫荧光组化染色，结果证明转导Isl-1基因的NSC向胆碱能运动神经元分化的比例明显比对照组增高，证明Isl-1基因有诱导NSC向胆碱能运动神经元分化的能力。这为胆碱能神经元的获得提供新的途径。