目的以抗原抗体之间特异性结合的特点为基础,分别利用量子点标记技术、共振能量转移技术建立牛奶中己烯雌酚、雌二醇残留的快速检测方法,完善我国兽药残留监控体系与兽药安全评价系统,为研究提供技术支撑。方法（一）荧光免疫检测方法建立。微孔板上包覆的雌激素抗原与体系中雌激素小分子竞争结合雌激素抗体。去除小分子与抗体形成的复合物后,用量子点标记二抗捕获微孔板中吸附的抗体,直接检测荧光信号,再转化为目标物定量检测结果。利用正交设计优化四因素五水平试验条件,分别建立牛奶中己烯雌酚和雌二醇的荧光免疫检测法,用于实际样品检测,进行评价。（二）基于量子点的共振能量转移方法研究。将雌二醇抗体和特定序列单链脱氧核糖核酸标记于量子点表面;另一特定序列单链脱氧核糖核酸偶联雌二醇抗原,与修饰淬灭剂的单链脱氧核糖核酸发生互补配对形成稳定复合物。功能化量子点与复合物共存时,抗体特异性识别并捕获抗原,量子点表面与淬灭剂端核酸结合区域互补配对形成稳定结构,二者发生共振能量转移,量子点淬灭。当雌二醇存在时,与抗原竞争使部分抗原抗体分离,淬灭剂结合区域杂交不稳定,释放复合物探针,荧光信号变化,可用于雌二醇定量分析。（三）将荧光免疫检测法与液相色谱质谱串联法和酶联免疫吸附试验检测结果进行方法学比较,评价方法稳定性,并将其应用到批量样品检测中进行考察。结果通过正交设计优化出试验最佳条件,建立了己烯雌酚的荧光免疫检测法标准曲线,线性范围在0.418-195.065 ng/m L间,线性方程为y=18.995-6.434x,线性拟合优度R2=0.997,最低检测限0.109 ng/m L;建立了雌二醇的荧光免疫检测法标准曲线,线性范围在0.472-66.597 ng/m L间,线性方程为y=7.858-3.197x,线性拟合优度R2=0.987,最低检测限0.236 ng/m L。建立了基于共振能量转移检测雌二醇的标准曲线,线性范围在3.125-100.000ng/m L之间,线性方程为y=406.96x+1350.12,线性拟合优度R2=0.993,最低检测限0.500ng/m L。荧光免疫检测法方法学比较结果一致,己烯雌酚加标回收率在95.83%-107.80%之间,与液相色谱质谱串联法差异有统计学意义（P=0.011<0.05）,与酶联免疫吸附试验差异无统计学意义（P=0.253>0.05）。雌二醇加标回收率在101.21%-110.04%之间,与液相色谱质谱串联法差异有统计学意义（P=0.002<0.05）,与酶联免疫吸附试验差异有统计学意义（P=0.031<0.05）。结论成功建立了两种可用于牛奶中雌激素检测的方法,基于共振能量转移的检测方法可在1小时之内迅速完成检测,经济便捷;方法比较结果提示荧光免疫检测法的检测结果与液相色谱-质谱串联法和酶联免疫吸附法结果一致,可用于实际牛奶样品的批量检测。