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研究背景:系统性红斑狼疮（Systemiclupuserythematosus,SLE）是一种弥漫性自身免疫性疾病,以T、B淋巴细胞活化、大量自身抗体及免疫复合物（immune complex,IC）形成及多组织器官受损为主要特征,多见于育龄期女性。目前认为遗传环境等多种机制共同参与了 SLE的发生发展,其中固有免疫细胞:如单核-巨噬细胞、自然杀伤细胞（natural killer cell,NK）及树突状细胞（Dendritic cells,DC）的异常活化广泛参与了 SLE免疫稳态的破坏。固有免疫可以通过激活适应性免疫应答清除外来病原体,通过固有免疫细胞细胞膜上和细胞质内的模式识别受体（pattern recognition receptor,PRR）识别相关病原体分子模式（pathogen associated molecular pattern,PAMP）发挥作用。其中,NOD 样受体（nucleotide binding oligome-rization domain-like receptors,NLRs）活化后激活半胱天冬酶-1（cysteinyl aspartate-specific proteinase,Caspase-1）,进一步活化下游细胞因子白介素-1β（interleukin-lbeta,IL-1β）和白介素 18（interleukin-18,IL-18）的前体,从而调节机体的炎症反应和免疫应答。NLRP3炎性小体由NLRP3、ASC和Caspase-1三部分通过PYD-CARD结构域组成。已有研究表明NLRP3炎性小体在SLE及狼疮肾损害的发生、发展中具有重要作用。我们课题组前期研究发现:NLRP3炎性小体组分在SLE患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）中呈低表达,在给予激素治疗后表达量升高,与SLE疾病活动相关指标呈负相关,因此考虑NLRP3可能在SLE的免疫发病中起到保护作用,这与NLRP3炎性小体经典活化途径不一致,推测可能存在NLRP3炎性小体非经典活化途径参与SLE发病。干扰素（interferon,IFN）是一种细胞因子,具有抗病毒和免疫调节等多种作用,广泛参与机体免疫反应与免疫调控。干扰素可激活非受体型酪氨酸蛋白激酶JAK（Janus Kinase）,并通过JAK-STAT信号通路调控基因的转录,进一步调节免疫应答。干扰素家族的理化性质和生物学特征各有不同,进一步分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型三类。其中,Ⅰ型干扰素是参与抗病毒免疫的重要效应分子,已有研究发现,Ⅰ型干扰素在SLE患者及狼疮鼠模型中存在普遍高表达,且与疾病活动密切相关。目前研究发现NLRP3炎性小体活化条件广泛,存在多种通路共同参与,毒素细菌、异物结晶、离子通路异常等均可活化NLRP3炎性小体。但是目前关于NLRP3炎性小体的负向调控机制研究较少,有研究发现I型干扰素可能负向调控NLRP3炎性小体的表达,但是对此还存在许多争议。本研究通过检测MRL/lpr狼疮小鼠体内IFN-α、IFN-β和NLRP3炎性小体的mRNA表达水平,并分析其与MRL/lpr狼疮小鼠抗ds-DNA抗体滴度及尿蛋白水平的相关性,探讨Ⅰ型IFN和NLRP3炎性小体在SLE发病中的相关性,探讨是否存在I型干扰素负向调控NLRP3炎性小体的机制。目的:探讨MRL/lpr狼疮小鼠体内I型IFN和NLRP3炎性小体的异常表达及Ⅰ型干扰素负向调控NLRP3炎性小体可能存在的机制。方法:选用9周龄SPF级MRL/lpr小鼠（狼疮小鼠模型）及野生型C57BL/6小鼠（健康对照）作为研究对象,其中MRL/lpr小鼠进一步分为:MRL/lpr小鼠组,MRL/lpr+泼尼松（2.5 mg/kg）组,MRL/lpr+泼尼松（5 mg/kg）组;每组各6只。分别给予不同剂量的醋酸泼尼松或生理盐水连续干预9周,期间观察小鼠关节肿胀及神经受累情况。干预结束后收集各组小鼠外周血、尿液及肾组织用于后续研究。采用CBB法检测小鼠尿蛋白浓度;酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunesorbent assay,ELISA）检测血清中抗 ds-DNA 抗体滴度;实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time Polymerase Chain Reaction,real-time PCR）法检测肾组织中 NLRP3、ASC、Caspase-1、IFN-α、IFN-β mRNA 表达水平;分析不同剂量泼尼松干预前后上述指标表达量的变化并探讨其相关性。结果:1.与健康对照组相比,MRL/lpr组小鼠血清抗ds-DNA抗体滴度呈高表达（P<0.001）,MRL/lpr+泼尼松（2.5 mg/kg）组和 MRL/lpr+泼尼松（5 mg/kg）组均能显著降低MRL/lpr狼疮小鼠血清抗ds-DNA抗体滴度（P均<0.001）,MRL/lpr+泼尼松（5 mg/kg）组较MRL/lpr+泼尼松（2.5mg/kg）组血清抗ds-DNA抗体滴度降低更显著（P=0.023）。2.与健康对照组相比,MRL/lpr组尿蛋白浓度呈高表达（P<0.001）;MRL/lpr+泼尼松（2.5 mg/kg）组、MRL/lpr+泼尼松（5 mg/kg）组干预后均能显著降低MRL/lpr 狼疮小鼠尿蛋白浓度（P<0.001;P=0.002）,MRL/lpr+泼尼松（2.5 mg/kg）组较MRL/lpr+泼尼松（5 mg/kg）组小鼠尿蛋白浓度降低更明显,但无统计学差异（P=0.340）。3.与健康对照组相比,MRL/lpr组小鼠肾组织中NLRP3、ASC mRNA呈低表达（P<0.001;P=0.001）,而 Caspase-1mRNA 呈高表达（P=0.009）。MRL/lpr狼疮小鼠经过泼尼松干预后,其NLRP3mRNA表达量上升,但无统计学差异（P=0.930;P=0.141）,MRL/lpr+泼尼松（5 mg/kg）组较 MRL/lpr+泼尼松（2.5 mg/kg）组NLRP3mRNA表达量上升更明显,但无统计学差异（P=0.146）;其ASCmRNA表达量下降,但无统计学差异（P=0.732;P=0.129）,MRL/lpr+泼尼松（5 mg/kg）组较MRL/lpr+泼尼松（2.5 mg/kg）组ASCmRNA表达量下降更明显,但无统计学差异（P=0.205）;其 Caspase-1mRNA 表达量下降,MRL/lpr+泼尼松（5 mg/kg）组与MRL/lpr组有统计学差异（P=0.021）,MRL/lpr+泼尼松（2.5 mg/kg）组与MRL/lpr 组无统计学差异（P=0.721）,MRL/lpr+泼尼松（5 mg/kg）组较 MRL/lpr+泼尼松（2.5 mg/kg）组Caspase-1mRNA表达量下降更明显（P=0.035）。4.与健康对照组相比,MRL/lpr组小鼠肾组织中IFN-α IFN-βmRNA呈高表达（P均<0.001）;与MRL/lpr组小鼠相比,MRL/lpr+泼尼松（2.5 mg/kg）组泼尼松干预后,其IFN-α、IFN-βmRNA表达量明显下降（P=0.002、P<0.001）;MRL/lpr+泼尼松（5 mg/kg）组泼尼松干预后,其IFN-α、IFN-βmRNA表达量明显下降（P<0.001,P=0.001）;其中 MRL/lpr+泼尼松（5 mg/kg）组较 MRL/lpr+泼尼松（2.5 mg/kg）组 IFN-α、IFN-βmRNA 表达量下降更明显（P=0.007、P=0.086）。5.MRL/lpr狼疮小鼠肾组织中NLRP3 mRNA表达量与Caspase-1mRNA表达量存在负相关（r=-0.561,P=0.024）;MRL/lpr狼疮小鼠肾组织中ASC mRNA表达量与Caspase-lmRNA表达量存在正相关（r=0.852,P<0.001）;MRL/lpr狼疮小鼠肾组织中NLRP3 mRNA表达量与ASCmRNA表达量无相关性（r=0.289,P=0.278）。6.MRL/lpr狼疮小鼠肾组织中NLRP3 mRNA表达量与IFN-α、IFN-β mRNA表达量存在负相关（r=-0.609,P=0.012;r=-0.795,P<0.001）;ASC mRNA 表达量与 IFN-α、IFN-β mRNA 表达量无相关性（r=0.278,P=0.297;r=0.238,P=0.375）;Caspase-1 mRNA表达量与IFN-α、IFN-β mRNA表达量无相关性（r=0.486,P=0.056;r=0.465,P=0.070）。7.MRL/lpr狼疮小鼠肾组织中NLRP3 mRNA表达量与血清ds-DNA抗体滴度呈负相关（r=-0.753,P=0.001）;与尿蛋白浓度无相关性（r=0.387,P=0.138）;ASC mRNA表达量与血清抗ds-DNA抗体滴度、尿蛋白浓度无相关性（r=0.316,P=0.233;r=0.300,P=0.260）;Caspase-1 mRNA 表达量与血清 ds-DNA 抗体滴度呈正相关（r=0.647,P=0.028）;与尿蛋白浓度无相关性（r=0.435,P=0.092）。8.MRL/lpr狼疮小鼠肾组织中IFN-α mRNA表达量与血清抗ds-DNA抗体滴度呈正相关（r=0.700,P=0.003）;与尿蛋白浓度无相关性（r=0.393,P=0.132）。IFN-βmRNA表达量与血清抗ds-DNA抗体滴度、尿蛋白浓度均呈正相关（r=0.785,P<0.001;r=0.700,P=0.003）。结论:1.MRL/lpr狼疮小鼠肾组织中NLRP3呈低表达,且NLRP3的低表达与抗ds-DNA抗体滴度呈负相关。2.MRL/lpr狼疮小鼠肾组织中Caspase-1呈高表达,且Caspase-1的高表达与抗ds-DNA抗体滴度呈正相关,推测Caspase-1与SLE和LN的发病有关,并与疾病活动呈正相关。3.MRL/lpr狼疮小鼠肾组织中I型干扰素（IFN-α、IFN-β）呈高表达,且与SLE病情活动密切相关,提示其可能参与SLE及LN的发病4.MRL/lpr狼疮小鼠肾组织中NLRP3与IFN-α、IFN-β的表达呈负相关,推测在SLE的发病过程中I型干扰素可能存在负向调控NLRP3的机制。