随着全球社会老龄化的不断发展,阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)越来越受到人们的重视。国际AD协会(Alzheimer’s Disease International)发布的《2016年全球阿尔茨海默症报告》显示,2016年全球患老年痴呆病的人数高达4700万人,到2050年或将增加近两倍,达到1.32亿人。有研究者认为突触功能障碍是造成AD认知功能损害的始动因素。除了突触丢失,突触功能紊乱以及突触可塑性受损也是AD进程中认知功能下降的主要特征。突触可塑性分为突触结构可塑性和突触功能可塑性,其功能可塑性发挥作用主要依靠相关谷氨酸受体的活性及其信号通路的激活,突触可塑性相关蛋白主要作用于NMDA受体和AMPA受体通路部分。因此突触可塑性在认知功能以及AD发展过程中起着重要的作用。临床研究显示,中医针灸治疗痴呆效果较好,患者的日常生活和认知能力均得到一定程度的改善。动物实验也发现针刺可以改善痴呆动物模型的突触传递效能、突触超微结构和学习记忆能力。本实验期望从突触可塑性角度进一步探讨电针改善AD认知功能的作用机制。实验目的以APP/PS1双转基因小鼠为动物模型,观察电针干预对突触可塑性相关蛋白PSD-95、SYN和GluN2B表达水平的影响。从突触可塑性相关蛋白表达的角度探讨电针在AD病理前期改善其认知功能的机制。实验方法将12只4月龄APP/PS1双转基因雄性小鼠随机分为电针组和模型组;以同月龄同性别的C57BL/6小鼠为正常组。将小鼠以自制鼠袋固定于操作台上,取“百会”、“涌泉”穴,刺入2～3mm,双侧“涌泉穴”接电针仪,采用疏密波,频率为1/50Hz,以针柄震颤为宜。每次针刺持续15min,一周三次,每周二、四、六进行干预,共干预6周。模型组和正常组采用相同方式束缚,每次15mim,一周三次,每周二、四、六,共6周。6周后进行取材,灌注后取脑。用免疫组化法观察PSD-95和SYN的表达情况;免疫荧光法观察Aβ的表达情况;Western Blot法检测小鼠海马内PSD-95、SYN和GluN2B的表达水平。实验结果免疫组化结果:PSD-95阳性表达呈棕黄色,主要分布在胞质、胞膜及突起上。正常组阳性表达着色较深,突起有较多的表达。模型组的阳性表达明显较少,着色浅,在突起上很少有分布。与模型组相比,电针组的阳性表达更多更为密集且着色更深。SYN的阳性表达呈棕黄色,主要分布在神经元外,而神经元胞体、轴突及树突不被标记,并且各组间阳性表达差异不明显。但模型组的阳性表达颜色比正常组阳性表达的颜色浅,电针组阳性表达的颜色较模型组更深。与模型组相比,正常组的突起结构完整,分布连续规则,而模型组突起形态结构不完整,电针组的突起较模型组来说,形态结构更为完整,分布更规则连续。免疫荧光结果:免疫荧光结果显示5月龄的APP/PS1双转基因小鼠海马内已经出现Aβ的表达,但未见成团的老年斑。正常组小鼠脑内未见Aβ的表达。并且正常组海马神经细胞排列整齐,细胞核清晰,主要呈圆形或椭圆形,且数量较多;而模型组海马神经元细胞排列散乱,细胞核不清晰;与模型组比较,电针组神经细胞排列更为规则整齐,细胞核也更为清晰。Western Blot结果:与正常组比较,模型组海马PSD-95表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,电针组PSD-95表达水平增高,差异有统计学意义(P<0.05)。与正常组比较,模型组海马SYN表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,电针组SYN表达水平增高,差异有统计学意义(P<0.01)。与正常组比较,模型组海马GluN2B表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,电针组GluN2B表达水平增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论电针可以升高病理前期APP/PS1双转基因小鼠海马内突触可塑性相关蛋白PSD-95、GluN2B和SYN水平,改善突触可塑性可能是电针改善AD认知功能的机制之一。