HCMV新基因UL49Z全长cDNA序列的克隆与生物信息学分析

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目的:利用RACE技术扩增HCMV Towne病毒株的新基因UL49Z基因全长cDNA序列,生物信息学方法对UL49Z基因全长cDNA序列进行分析,为进一步阐明HCMV UL49区域的基因结构,研究该区域作为的病毒复制关键区域的分子机制奠定基础。方法:将HCMV Towne病毒株接种至人包皮成纤维细胞(HFF)中,收集病毒感染不同时间的细胞,抽提病毒RNA,运用RACE技术确定了新基因UL49Z的3’端和5’端,运用RT-PCR技术扩增基因的全长序列,对RACE产物和PCR产物作TA克隆,重组体进行测序鉴定,将测序所得的基因序列进行生物信息学分析。结果:HCMV Towne病毒株成功感染了培养的人包皮成纤维细胞(HFF),成功抽提了不同感染时期的病毒RNA,运用RACE和RT-PCR技术发现了一个新的转录本,暂时命名为UL49Z,作TA克隆后重组子测序鉴定成功,确定了UL49Z新基因的全长为从68629到72830处,并发现其71181到71276处有个典型的内含子。结论:HCMV UL49区域存在一个新的转录本,本研究为进一步研究该基因的功能奠定基础。
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