不同饵料对鲤肝脏组织结构、酶活性、mRNA及microRNAs表达的影响

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为探究不同饵料对鲤肝脏健康的影响,以鲤(492.6±30g)为研究对象,270尾试验鱼随机分为蚯蚓组(A)、混合饵料组(蚯蚓:浮萍=1:1,B)和浮萍组(C),每个处理三个重复,正式试验8周,饥饿24h取样。研究结果如下:1.摄食不同饵料的鲤肝脏组织学研究混合饵料组仅1尾试验鱼部分肝细胞发现空泡变性和点状坏死,未发现明显脂肪变性。蚯蚓组5尾试验鱼均发现了空泡变性,2尾试验鱼部分肝细胞发现脂肪变性,2尾试验鱼肝细胞发现点状坏死。浮萍组4尾试验鱼发现空泡变性,2尾试验鱼的少量肝细胞观察到点状坏死,未观察到明显脂肪变性。混合饵料组肝脏组织形态最正常。2.摄食不同饵料的鲤肝脏消化酶、抗氧化酶和免疫酶活性差异研究肝脏消化酶活性测定结果表明,B组试验鱼肝脏的蛋白酶和脂肪酶活性显著低于A组(P<0.05),B组蛋白酶和脂肪酶活性显著高于C组(P<0.05),而B组的α-淀粉酶活性显著高于A组(P<0.05)。肝脏抗氧化酶活性测定结果表明,B组试验鱼肝脏的超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽转移酶(GSH-Px)活性显著高于A组和C组(P<0.05),并且B组丙二醛含量(MDA)显著低于A组(P<0.05)。肝脏免疫酶活性测定结果表明,B组试验鱼肝脏的免疫酶活性显著高于A组和C组,包括酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)(P<0.05)。3.摄食不同饵料的鲤肝脏mRNA鉴定和差异表达分析每组各随机取3尾进行RNA-seq,平均获得41,645,543个原始序列,261,934个新转录本,123729个可变剪切,168347个单核苷酸多态性(SNP)位点和10780个插入或缺失(INDELs)位点。通过差异分析,在A组与B组共鉴定出916个差异表达基因,其中18个上调表达和898个下调表达;在C与B组中共鉴定出有1296个差异表达基因,其中49个上调表达和1247个下调表达。通过GO和Pathway分析,A组与B组差异基因主要富集到8个KEGG通路,C组与B组差异基因主要富集到11个KEGG通路,其中“蛋白质消化吸收”、“胆汁分泌”、“造血细胞谱系”、“肠免疫网络生成IgA”和“细胞粘附分子”5个通路共同显著富集。4.摄食不同饵料的鲤肝脏microRNAs鉴定和差异表达分析每组试验鱼各随机取3尾进行miRNA-seq,剔除转录本序列长度不以22nt为主的三个样本后进行后续分析。本试验总共在6个miRNAs文库中鉴定出236个已知的鲤miRNA。通过差异分析,A组和B组鉴定出9个差异表达的miRNAs,预测到了 189个靶基因;C组和B组鉴定出8个差异表达的miRNAs,预测到了 234个靶基因。对靶基因进行GO和Pathway分析,结果显示miRNAs主要参与代谢过程、细胞凋亡过程。以上结果表明,在本试验条件下,与动物性或植物性饵料相比,混合饵料可能更有利于鲤的肝脏健康。
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