目前,体细胞胚胎早期发生困难严重制约着牡丹的体细胞胚胎再生体系的建立,进一步制约了牡丹的快速繁殖。国内外学者对体细胞胚胎发生类受体蛋白激酶（somatic embryogenesis receptor-like kinase,SERK）基因结构和功能进行了大量研究,表明SERK基因是植物胚性愈伤组织早期发生的分子标记之一。为了研究PsSERK的功能,本试验构建了牡丹品种‘凤丹白’愈伤组织cDNA文库,并利用酵母双杂交系统对文库中PsSERK相互作用蛋白进行研究,这些研究对揭示牡丹早期体细胞胚胎发生的分子机制起着重要作用。构建酵母双杂交诱饵载体及检测其自激活性。通过PCR扩增获得带有相应酶切位点的目的基因PsSERK1和PsSERK2,分别将其与诱饵载体pGBKT7和捕获载体pGADT7连接,筛选后获得重组子pGBK-SERK和pGAD-SERK。通过醋酸锂法将重组子pGBK-SERK单转化到酵母菌Y2HGold中,将重组子pGBK-SERK和pGAD-SERK共转化到酵母菌Y2HGold中,用不同营养缺陷型培养基对转化产物进行筛选,分别检测PsSERK蛋白对酵母细胞Y2HGold的自激活活性、毒性和PsSERK蛋白自互作情况。结果表明PsSERK蛋白对酵母Y2HGold细胞未表现出自激活活性和毒性,且PsSERK蛋白自身未检测到互作现象。提取牡丹品种‘凤丹白’愈伤组织总RNA,分离纯化获得mRNA后,在SuperScript? Ⅲ RT和T4 DNA聚合酶的作用下逆转录合成平末端双链cDNA,并在其5’端加上attB1接头,通过Gateway重组技术将cDNA文库定向插入到捕获载体pGADT7中,得到牡丹品种‘凤丹白’愈伤组织的酵母双杂交cDNA文库,对文库质量进行检测。结果表明:构建的cDNA文库初始滴度为2.4×106CFU/mL,重组效率为100%,cDNA文库中携带的牡丹愈伤组织基因片段长度主要集中在500～3000 bp之间。将诱饵质粒pGBK-SERK和文库质粒pGAD-cDNA共转化到酵母菌Y2HGold感受态细胞中,用不同营养缺陷型培养基对其进行筛选,获得可能与PsSERK蛋白发生互作关系的阳性克隆。通过PCR反应,获得阳性克隆中插入的cDNA片段,送公司进行测序。在NCBI官方网站上对测序结果进行Blast分析,结合相关研究报道,对阳性克隆中插入的cDNA片段序列及功能进行分析。结果表明,以PsSERK为诱饵,从牡丹品种‘凤丹白’愈伤组织中筛选获得了 3个不同的阳性克隆,初步推测这些蛋白可能通过促进氨基酸、脂肪酸等物质代谢反应,在细胞内信号传导过程中发挥作用,进而诱导体细胞胚胎发生。