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目的研究探讨整合素β1与微管蛋白alpha 1A(tubulin alpha 1A,TUBA1A)的相互作用在非霍奇金淋巴瘤细胞粘附介导的耐药(Cell adhesion mediated drug resistance,CAM-DR)中的机制及意义。方法1、构建人淋巴瘤细胞OCI-Ly8及Raji与人骨髓基质细胞HS-5或纤连蛋白(Fibronectin,FN)粘附模型,钙黄绿素实验检测细胞的粘附情况蛋白免疫印迹(Western Blot)检测整合素β1蛋白及TUBA1A的表达。利用干扰质粒沉默整合素β1的表达,CCK-8细胞活力实验、流式细胞术等实验检测其表达水平改变对淋巴瘤细胞活性、细胞周期、细胞凋亡的影响。2、在工具细胞HEK 293T中分别转染HA标签的整合素β1和Flag标签的TUBA1A的真核表达质粒,细胞免疫共沉淀实验明确整合素β1与TUBA1A的相互作用。构建整合素β1截短突变体,免疫共沉淀实验明确整合素β1与TUBA1A相互作用的结构域。在人淋巴瘤细胞OCI-Ly8及Raji内验证两者相互作用。3、过表达整合素β1后,沉默TUBA1A的表达,检测其相互作用变化。干扰两者相互作用,钙黄绿素实验分析整合素β1与TUBA1A相互作用对淋巴瘤细胞粘附能力的影响。同时,流式细胞术、细胞活力实验及Western Blot等实验进一步明确相互作用对淋巴瘤细胞CAM-DR的影响。4、干扰TUBA1A的表达,检测整合素β1与TUBA1A的相互作用变化,并检测其对整合素β1下游通路活性的影响;钙黄绿素实验检测其对整合素β1胞膜表达水平、及细胞粘附的影响。结果1、利用FN或HS-5构建淋巴瘤细胞黏附培养模型,实验结果显示微管蛋白TUBA1A及整合素β1蛋白在淋巴瘤细胞粘附培养时表达较悬浮培养增加。在淋巴瘤细胞中干扰整合素β1表达,钙黄绿素实验结果显示淋巴瘤细胞与基质细胞发生粘附的数量下降;利用多柔比星诱导淋巴瘤细胞凋亡,整合素β1的表达下降可以增加粘附状态下淋巴瘤细胞对化疗药物的敏感性,并使其细胞活力降低。2、免疫共沉淀实验结果显示,在工具细胞HEK-293T细胞中,整合素β1和TUBA1A存在明显的相互作用;并且,在淋巴瘤细胞中也发现了整合素β1和TUBA1A明显的相互作用,粘附培养的淋巴瘤细胞中两者相互作用有所增加。结构域分析实验发现,整合素β1通过其胞膜内段结构域与TUBA1A发生相互作用。3、在淋巴瘤细胞中过表达整合素β1,实验结果显示其与TUBA1A相互作用增加。沉默TUBA1A的表达后,发现其相互作用水平也随之下降。干扰整合素β1与TUBA1A的相互作用,细胞活性实验结果显示淋巴瘤细胞粘附能力下降,流式细胞术实验结果显示细胞凋亡数量增加,淋巴瘤细胞对化疗药物敏感性增加。4、在淋巴瘤细胞中干扰TUBA1A表达,整合素β1的胞膜表达下降,并且整合素β1下游通路活性降低。淋巴瘤细胞粘附能力及耐药能力均发生显著下降。TUBA1A表达下降可通过调节整合素β1下游通路活性抑制淋巴瘤细胞粘附及耐药。结论1、整合素β1和微管蛋白TUBA1A均可促进非霍奇金淋巴瘤细胞与基质细胞粘附、诱导淋巴瘤细胞粘附介导的耐药形成;2、在非霍奇金淋巴瘤细胞中,整合素β1和微管蛋白TUBA1A能够发生相互作用;3、整合素β1促进淋巴瘤细胞粘附及粘附介导的耐药进程,其可通过干预微管蛋白TUBA1A的表达抑制其生物学效应;4、微管蛋白TUBA1A促进整合素β1的胞膜聚集,并通过调节整合素β1下游信号通路影响非霍奇金淋巴瘤细胞微环境介导的耐药形成的。