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目的:通过建立实验性精索静脉曲张(VC)大鼠模型,观察睾丸组织的病理切片,描述睾丸组织,生精细胞及睾丸间质的病理改变,并通过测定血清睾酮、血清抑制素B的浓度,了解VC对睾丸生精上皮的直接损害,及机体下丘脑-垂体-性腺轴反馈性调节状况,探讨VC对睾丸组织生精功能的影响及导致不育的机制。 方法:动物分组:选择鼠龄(50±10)天(青春期),体重240~280g的SD(Sprayue-Dawley)三级雄性大鼠40只。将大鼠按随机化原则分为精索静脉曲张组(试验组)20只,假手术组(对照组)20只。 模型建立:动物模型依据Turner的方法建立:实验组大鼠以10%水合氯醛(3.33 ml/kg)腹腔注射麻醉,麻醉成功后,取腹正中切口约5cm,切开全层腹壁,暴露腹腔。确认左侧肾脏,左肾上腺静脉,左精索静脉位置后,仔细分离左肾静脉,在左肾上腺静脉与下腔静脉之间的左肾静脉处,放置一根直径约0.8 mm的金属杆,用4-0丝线将其与左肾静脉一同结扎,使静脉直径大约缩小一半。结扎完成后抽出金属杆,可见左肾静脉迅速扩张。以4-0的丝线缝合伤口。对照组大鼠在显露左肾静脉后只穿线打结,而不缩窄左肾静脉。以精索静脉最大直径>1 mm,左右肾重量无明显差别为模型建立成功标准。 标本采集:术后12周,给与腹腔注射10%水合氯醛麻醉,成功后取下腹正中切口,暴露双侧肾脏,后采用10ml空针注射器,分别取下腔静脉血4-5ml,置于离心管内(不抗凝),待标本凝集后以3000转/分,离心15min,取上层血清于Eppendof管保存于-20℃待测。后切取左侧睾丸,大鼠脱颈椎法处死,剪除睾丸周围筋膜及附睾,用冷盐水洗净,滤纸吸干水分,置于10%中性甲醛溶液中固定24小时,后将睾丸切成1-2mm厚薄片,梯度脱水,石蜡包埋组织块。 检测方法:血清抑制素B的测定采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测,用酶标仪测定每个样本在450nm波长下的OD值,将吸光度值对照标准曲线得出每个样本的浓度值。血清睾酮的测定采用Access Testosterone(化学发光法)测定,使用B ECKMAN COULTER DX I800全自动免疫分析仪严格按规定流程测定样本血清睾酮浓度。睾丸组织切片后行HE染色,每张切片随机选取10个视野,并对视野中的曲细精管生精上皮病理变化情况作出评分,其平均值为此样本的Johnson评分。 统计学分析:血清睾酮浓度、血清抑制素B浓度及Johnson评分采用计量资料x-±s表示,样本均数的比较利用两独立样本t检验,采用SPSS13。0软件进行统计分析,以P<0.05为具有统计学意义。 结果: 1血清睾酮检测结果:实验组SD大鼠术后3月,血清睾酮平均为5.21±0.44nmol/L,较对照组血清睾酮浓度5.49±0.49nmol/l,水平稍有下降,但差异无统计学意义(P>0.05)。 2血清抑制素B检测结果:实验组SD大鼠术后3月血清抑制素B水平为392.90±52.37pg/ml,较对照组血清抑制素B水平764.90±60.65pg/ml明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。 3 Johnson评分:实验组大鼠睾丸组织的Johnson评分为7.44±1.00,与对照组评分9.48±0.28相比,明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。 4睾丸病理改变结果:睾丸组织的病理损伤表现为:1、曲细精管内生精细胞脱落,实验组SD大鼠睾丸组织此种病变占90%,严重者可发生管腔堵塞。2、生精上皮基底膜增厚、纤维样和透明变性占到75%;3、睾丸间质病变,包括睾丸间质组织水肿、间质细胞变性占65%;4、间质血管病变,包括小动脉管壁增厚、管腔缩小甚至闭塞,小静脉扩张充血及淋巴管扩张占85%。对照组仅发现两例生精细胞脱落,及一例间质水肿。差异均具有统计学意义。 结论: 1精索静脉曲张会对睾丸生精组织产生不同程度的损害,而导致生精功能的降低。 2睾丸组织的损伤可通过使血清抑制素B水平降低,反馈性作用于下丘脑-垂体-性腺轴,代偿性调节性腺功能。 3睾丸生精功能的维持与血清睾酮的水平未发现直接的依赖关系。