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目的:N-myc下游调节基因-2(NDRG2)属于NDRG基因家族,在调节细胞增殖、分化和凋亡方面起重要作用,与多种肿瘤的发生发展密切相关。本研究旨在探讨NDRG2在慢性淋巴细胞白血病(CLL)中的表达及其临床意义。方法:采用实时定量逆转录PCR(q RT-PCR)分别检测102例CLL患者和40例正常人外周血淋巴细胞NDRG2 m RNA表达水平,运用循环阈值(CT)比较法进行NDRG2 m RNA相对定量分析,上述基因的相对表达量以公式2(-△Ct)表示。流式细胞术(FCM)检测CLL细胞CD38和ZAP-70表达水平,PCR联合DNA序列分析测定p53突变和免疫球蛋白重链可变区(IGHV)突变状态,间期荧光原位杂交(FISH)技术检测细胞遗传学异常。采用SPSS 20.0及Graph Pad Prism5.0软件进行统计学分析,两组间NDRG2 m RNA表达水平的差异采用Mann-Whitney U检验,Kaplan-Meier法计算总生存时间(OS)和至首次治疗时间(TTT),Log-Rank法进行差异性检验。P<0.05为差异有统计学意义。结果:NDRG2基因在CLL患者和正常对照组的中位表达水平分别为0.0017(0~0.0467)和0.0044(0.0028~0.0343),差异具有统计学意义(P<0.001)。临床分期较早者(Binet A+B期)NDRG2 m RNA水平明显高于临床分期较晚者(Binet C期)(P=0.022),CD38阴性患者中NDRG2 m RNA水平明显高于阳性者(P=0.013),无p53突变患者中NDRG2 m RNA水平明显高于突变者(P=0.026),不伴有del(17p13)患者中NDRG2 m RNA水平明显高于缺失者(P=0.005)。NDRG2表达高组和低组的CLL患者中位TTT分别为59个月和21个月,差异具有统计学意义(P=0.019)。中位随访时间40个月(6~125个月),NDRG2表达高组和低组的CLL患者OS率分别为92.3%和18.9%,差异具有统计学意义(P=0.024)。结论:NDRG2基因在CLL患者中低表达,NDRG2表达水平与CLL患者临床特征存在相关性,并具有预后价值。目的:研究慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞的NDRG2基因启动子甲基化和NDRG2基因低表达的相关性,探讨CLL患者NDRG2基因低表达的机制。方法:收集40例CLL患者和10例健康正常人标本,用常规方法从外周血的淋巴细胞中抽提基因组DNA。采用甲基化特异性聚合酶链式反(MSP)检测NDRG2基因启动子序列是否发生甲基化,阳性结果均使用基因测序法验证。流式细胞术(FCM)检测CLL细胞中CD38和ZAP-70表达水平,PCR联合DNA序列分析测定p53突变和免疫球蛋白重链可变区(IGHV)突变状态,间期荧光原位杂交(FISH)技术检测细胞遗传学异常。采用SPSS 20.0软件包进行统计学分析,两组间NDRG2 m RNA表达水平的差异采用Mann-Whitney U检验。P<0.05为差异有统计学意义。结果:40例CLL患者中有4例存在NDRG2基因的部分甲基化(10%),正常对照标本中均为出现NDRG2基因的甲基化。甲基化状态经测序后验证,测序图中显示甲基化患者的C序列未发生改变,而无甲基化者碱基C变成T。40例患者中有21例检测了NDRG2表达,包括4例存在部分甲基化的CLL患者。4例存在部分甲基化的CLL患者NDRG2 m RNA中位值为0.0010(0.0003~0.0166),无甲基化的患者NDRG2 m RNA中位值为0.0019(0~0.0352),但两组的NDRG2基因表达差异无统计学意义(P=0.965)。结论:CLL细胞中存在NDRG2基因启动子甲基化,但NDRG2启动子的甲基化不占优势,CLL中NDRG2的低表达可能与该基因的甲基化状态无明显相关。目的:微小RNA(miRNA,miR)可以通过与靶标基因3’UTR的完全或不完全配对,降解靶标基因m RNA或抑制其翻译。在肿瘤发生中miRNA可以发挥癌基因或抑癌基因作用。本研究旨在研究慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞中miRNA与NDRG2之间的调控关系。方法:通过生物信息学方法候选出调控NDRG2基因的保守miRNA,构建双荧光素酶报告基因载体,分别构建含有靶基因PTEN 3’非翻译区(UTR)的p EZX质粒,采用脂质体2000与侯选的miRNA类似物或阴性对照(NC)共转染人源胚胎肾细胞293T细胞株,24 h后观察荧光素酶的活性。11例CLL原代细胞分别转染验证后的反义miRNA及NC,培养24 h后,实时定量逆转录PCR(q RT-PCR)和蛋白免疫印迹杂交(WB)检测转染后相应的miRNA和NDRG2基因的变化,流式细胞术(FCM)Annexin/PI双染法检测转染反义miRNA及NC的细胞凋亡率。FCM检测CLL细胞中CD38和ZAP-70表达水平,PCR联合DNA序列分析测定p53突变和免疫球蛋白重链可变区(IGHV)突变状态,间期荧光原位杂交(FISH)技术检测细胞遗传学异常。采用SPSS 20.0及Graph Pad Prism 5.0软件进行统计学分析,用Paired-Samples T Test检验进行miRNA表达、NDRG2表达及细胞凋亡率的差异分析。以P<0.05代表其差异有统计学意义。结果:检索miRNA数据库侯选出4个相对保守可能调节NDRG2基因的miRNA:hsa-miR-29a、hsa-miR-29c、hsa-miR-28-5p和hsa-miR-650。双荧光素酶报告实验显示hsa-miR-28-5p和hsa-miR-650对NDRG2基因有显著抑制作用。q RT-PCR方法检测转染反义hsa-miR-28-5p和反义hsa-miR-650的miRNA水平,与NC相比,相应的miRNA明显受抑制(P=0.009和P=0.019)。q RT-PCR和WB方法检测转染反义hsa-miR-28-5p和反义hsa-miR-650的NDRG2 m RNA和蛋白水平,与NC相比,转染反义hsa-miR-28-5p和hsa-miR-650组NDRG2 m RNA和蛋白水平均较NC组明显上调。FCM检测显示在p53正常组,转染反义hsa-miR-28-5p和hsa-miR-650较NC组CLL细胞凋亡率显著增加,而在p53缺失组,转染上述反义miRNA后CLL细胞中位凋亡水平较NC组无明显变化。结论:NDRG2基因在CLL细胞中的低表达可能与hsa-miR-28-5p和hsa-miR-650的调控有关,在p53正常的细胞,抑制hsa-miR-28-5p和hsa-miR-650的表达增加NDRG2基因的表达后可以促进CLL细胞的凋亡。