水稻颖花发育基因PD1和茸毛基因HL1的定位与克隆

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颖花作为水稻中重要的光合产物的贮藏器官之一,对水稻的产量及品质产生直接的影响。本实验中,在经γ-射线诱变后的籼稻品种93-11的M2群体中,我们发现了 1个内稃发育不良的突变体pd1,其内稃变小,形似叶片,进而导致外稃明显向内弯曲。pd1突变体的结实率只有46%,千粒重只有21.6 g,最终导致产量下降了2/3。电镜扫描发现,pd1突变体的外稃及内稃的表皮细胞的大小及密度均比野生型的有所降低。前期研究对该突变体进行了性状的遗传分析,并将基因定位于第1染色体的RM11239--RM11245之间约69Kb物理区间,其中包含10个ORFs。本研究在此基础上,对10个候选基因进行测序分析,结果发现除了反转座子ORF3没有克隆出来外,克隆的其余的9个ORFs在两个品种中的序列完全一致;为了进一步找出候选基因,又对其进行qRT-PCR分析,结果显示ORF3在突变体及野生型中均无表达。由此推测,可能是存在于该区间一个未知的遗传因子参与水稻颖花发育的调控。植物的表皮毛可以减少热量和水分的散失,减少害虫和病原菌的侵害,对植物体起到一定的保护作用。为了深入研究叶片表面茸毛的遗传机制,本研究中我们选用茸毛叶的籼稻品种苏旺往尔和非茸毛叶的粳稻品种日本晴和宁稻1号作为实验材料。前期研究将位于第6号染色体的在两个亲本间有2处SNPs差异和1处碱基缺失的基因LOC_Os06g44750作为HL1的候选基因。本研究对其定位结果进行了验证,结果将其定位到新开发的WB31和WB35标记之间,物理距离为73.1 Kb,包含8个ORFs,其中还包含有LOC_Os06g44750(ORF7)。对另外12个非茸毛叶品种进行测序发现发现ORF7在茸毛叶水稻品种和非茸毛叶水稻品种之间存在差异。对这8个ORFs进行qRT-PCR分析发现,ORF7在苏旺往尔中有表达,而在日本晴和宁稻1号中均没有表达。由此判断ORF7为HL1候选基因,构建过表达载体及互补表达载体,转入非茸毛叶品种日本晴中进行初步功能验证。
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