眼睛的发育过程中包括很多转录因子,其中Sox2、Pax6、Six3、Prox1、L-maf等的作用最为突出。它们能够形成复杂的调控网络,通过协同或拮抗作用精确地作用于靶基因或组织,调控正常的发育和再生过程。本实验以模式生物非洲爪蟾(xenopus laevis)为实验材料,通过RT-PCR,构建重组表达质粒,原核表达,蛋白纯化,免疫新西兰大白兔等方法成功获得兔抗Sox2、兔抗Pax6、兔抗Six3三种抗体。以此为基础对非洲爪蟾眼睛发育及再生过程中三种转录因子的表达情况进行western blot分析。正常发育过程结果表明:12—26期Pax6和Sox2的表达趋势一致,分别在18期和24期左右出现表达高峰,26期之后Sox2和Pax6表达呈现相反的趋势,Pax6在第34期时再次出现高峰,而Sox2在30期出现表达高峰。Six3的表达从26期之后明显下降。晶状体再生结果表明:晶状体再生第9天时Pax6出现表达高峰,six3表达呈现明显下降趋势,Sox2表达水平一直很低。酵母双杂交结果显示:只有共转化pGBK-T7-six3和pGAD-T7-sox2的一组酵母菌明显变蓝,pGAD-T7-pax6和pGBK-T7-sox2一组有微弱变蓝。以上结果说明三种转录因子不仅在促进细胞增殖及分化方面发挥作用,更是促进晶状体蛋白表达及晶状体纤维化过程中不可缺少的因子。推测出三种转录因子在非洲爪蟾晶状体发育及再生过程中的表达模式,更进一步验证了三者之间的相互作用关系,为进一步探究晶状体发育及再生过程中的分子机制奠定了基础。