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背景:猪脱细胞真皮基质(PADM)与人脱细胞真皮基质结构相似,为皮肤组织再生修复和创伤愈合提供支架和细胞生长的微环境,广泛用于临床创伤治疗。然而,异种免疫排斥反应及创面感染会严重影响皮肤的再生修复和功能重塑。研究表明,使用α-半乳糖苷酶可去除PADM上残留的主要异种抗原α-Gal((Gala1,3-Galb1-4GlcNAc-R)抗原。制备的去α-Gal抗原猪脱细胞真皮基质(简称PADM-AR)免疫排斥反应低,生物相容性好,再生修复能力强,是皮肤组织再生修复的良好材料。抗菌肽是自然界中存在的具有抗菌作用的短肽,一般含10-50个氨基酸,分子量小,易溶于水,热稳定性好,具有广泛抗菌性等作用。抗菌肽不会产生耐药性,对多种耐药菌株具有广谱的抑制作用。目的:制备免疫原低、生物相容性好、再生修复能力强的去α-Gal抗原猪脱细胞真皮基质(PADM-AR);使用三种抗菌较强的抗菌肽(melittin、RV-23和LL-37)分别和PADM-AR复合,制备复合材料;分析复合材料的生物学特性,期望获得抗菌活性强,生物相容性好、再生修复能力强的新型创伤修复材料。方法:使用物理化学方法去除猪皮上的细胞,制备猪脱细胞真皮基质(PADM);α-半乳糖苷酶处理PADM,制备去α-Gal抗原的猪脱细胞真皮基质(PADM-AR)。HE染色法观察PADM-AR形态;FITC-IB4免疫荧光技术分析PADM-AR上的α-Gal抗原水平;免疫组织化学法检测PADM-AR上FGF和VEGF水平;提取硫酸粘多糖,测定PADM-AR上硫酸粘多糖含量。将PADM-AR,一部分用直径6mm的打孔器制成直径6mm,厚度约1mm的小圆片。另一部分-80℃冰冻研磨成粉,制成粉末状的PADM-AR。合成melittin,RV-23和LL-37抗菌肽。将直径6mm圆片状的PADM-AR或10mg粉末状的PADM-AR分别与不同浓度的抗菌肽melittin,RV-23,LL-37进行复合,制备PADM-AR/抗菌肽复合物;抑菌实验检测含有不同浓度抗菌肽的复合材料PADM-AR/melittin、PADM-AR/RV-23和PADM-AR/LL-37抗菌活性;溶血实验检测含有不同浓度抗菌肽的复合材料PADM-AR/melittin,PADM-AR/RV-23和PADM-AR/LL-37对红细胞膜的破裂作用;然后再检测含不同浓度抗菌肽的复合材料PADM-AR/melittin,PADM-AR/RV-23和PADM-AR/LL-37对真核上皮细胞增殖活性的影响,以分析其细胞毒性。Tricine-SDS-PAGE电泳检验复合材料中抗菌肽是否降解掉。结果:制备了仅保留胶原等三维结构的猪脱细胞真皮基质(PADM),经α-半乳糖苷酶处理,清除了PADM上的α-Gal抗原,清除率大于90%,命名为去α-Gal抗原的猪脱细胞真皮基质(PADM-AR)。免疫组织化学和硫酸粘多糖检测实验证实,PADM-AR上含有粘多糖和FGF及VEGF等生物活性物质,说明PADM-AR具有完整的天然结构和生物活性成分。将PADM-AR制成片状和粉末状,并分别与抗菌肽melittin、RV-23和LL-37复合,制备了含不同浓度抗菌肽的复合材料PADM-AR/LL-37、PADM-AR/melittin、PADM-AR/RV-23。三种抗菌肽均具有很强的抗菌活性,制备成复合材料后保留了相应的抗菌活性,随着复合材料中抗菌肽浓度的升高,抗菌活性越强。三种抗菌肽均有一定溶血活性,其中melittin溶血活性最高,RV-23次之,而LL-37最低。而复合材料溶血活性均很低,远低于相同浓度的抗菌肽组。提示PADM-AR对红细胞有一定保护作用。三种抗菌肽中,Melittin有较强的细胞毒性,RV-23细胞毒性较弱,而LL-37细胞毒性非常低。含3种抗菌肽的复合材料对人永生化上皮细胞HaCaT细胞或小鼠成纤维细胞NIH-3T3细胞几乎没有毒副作用。提示PADM-AR中和了三种抗菌肽对真核细胞细胞毒性。复合材料PADM-AR/LL-37、PADM-AR/melittin、PADM-AR/RV-23较稳定,抗菌肽没有变性或降解。结论:制备了具有天然三维结构和生物学活性的低免疫原猪脱细胞真皮基质(PADM-AR),并进一步与3种抗菌肽结合制备PADM-AR/抗菌肽复合材料。初步研究证实复合材料保留了良好的抗菌活性,并且降低了抗菌肽的溶血活性和细胞毒性。在三种复合材料中,PADM-AR/LL-37的抗菌活性最强,溶血活性和细胞毒性最低,是最佳的复合材料。我们认为PADM-AR/LL-37复合物有可能成为免疫原性低、生物相容性好、抗菌活性高、再生修复能力强的创伤修复材料,在创伤治疗中发挥重要作用。