狗肠新生物活性肽的分离纯化及结构测定

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哺乳动物的胃肠道被认为是体内最大、最重要的内分泌器官。对其分泌的胃肠激素的研究已诞生了一门学科:胃肠内分泌学。随着蛋白质化学技术的发展,对胃肠激素的研究不断深入。 大多胃肠激素在化学属性上属于多肽类,分子量大多在2kD~5kD范围,是热稳定性多肽。自1902年bayliss首先发现胰液素以来,已从中分离纯化出许多类型的胃肠肽,这些多肽根据其功能和一级结构的相似性大致可分为以下几个族:胰液素/胰高血糖素家族(最大的家族);胆囊收缩素/胃泌素家族;胰多肽家族;速激肽家族;促生长激素抑制素/cortistatin家族;阿片样物质;胃泌素释放肽/蛙皮素家族;肠和胰腺中的三叶肽;抗菌肽家族。近些年来,有一些新的胃肠肽被分离,他们不具备这些已知肽的典型序列。 这些肽以复杂的调节方式,对生命现象发挥重要的作用,与疾病密切相关。分离纯化天然存在的多肽是研究其结构、功能及物理、化学特性的首要步骤。 本实验以狗肠作为研究对象,首先用沸水处理狗小肠,然后经醋酸提取、海藻酸吸附、盐酸洗脱、氯化钠盐析和乙醇沉淀,再经Sephadex G-25(fine)层析和两次RP-HPLC分离,从中纯化出一个热稳定多肽。用Tris-Tricine-SDS-PAGE鉴定其分子量约为4kD。该肽经胰酶水解,产物片断经RP-HPLC分离后,取其中的一个主峰对应的肽段经CapLC-ESI-MS-MS(Q-TOF2)质谱仪测定氨基酸顺序为:T-E-Y-T-A-L-N-V-L-A-T-T-E-E-N-G。将该段氨基酸序列登录美国国立医学图书馆(NCBI),应用Blast检索工具进行短序列匹配的蛋白质数据库检索发现::此肽为首次发现的新多肽。经膜片钳实验初步检测,该肽能够增强胰腺β细胞膜的外向电流,对其完整的生理功能,尚待深入研究。
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