巴西橡胶树鲨烯合酶基因(HbSQS)克隆与功能研究

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鲨烯合酶(squalene synthase, SQS)是三萜合成代谢关键酶,它能催化两分子法尼基焦磷酸(FPP)缩合生成萜烯类化合物(的第一个合成前体—鲨烯。目前有关橡胶树萜类合成代谢路径及调控机制还不完全清楚,研究萜类合成代谢关键酶SQS基因及其表达模式,将为进一步研究其对天然橡胶合成的影响及巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)萜烯类合成代谢机制奠定基础。本研究选用巴西橡胶树无性系热研7-33-97为实验材料,克隆出一个鲨烯合酶基因并命名为HbSQS。分析了HbSQS基因的表达模式,并对HbSQS基因进行生物信息学分析。主要的研究结果如下:1.根据橡胶树转录组数据库中的搜到的SOS基因部分序列设计引物扩增得到了一段SQS基因序列。再通过RACE技术扩增出HbSQS基因的全长cDNA序列。HbSQS基因包含了一个1239bp的完整的开放阅读框,编码413个氨基酸。预测其蛋白质分子量为46967.54,理论等电点为7.95。2.HbSQS与蓖麻、大豆、毛果杨、葡萄、烟草、水稻、拟南芥、人参的鲨烯合酶基因序列的同源性分别为96.37%、86.44%、85.96%、85.96%、83.54%、69.66%、76.63%、83.37%。HbSQS蛋白质结构域主要包含6个保守区,其中3中高度保守。3.乙烯可以调控HbSQS在胶乳中的表达。组织特异性表达分析表明HbSQS在树皮的表达量高于在叶片中的表达量,在叶片中,随着叶片成熟度的加深基因表达量逐渐增加。4.在大肠杆菌中,成功的表达出了HbSQS蛋白的部分肽段。5.烟草中过表达及基因沉默分析。将HbSQS基因的开放阅读框的正义序列及反义序列分别构建到植物过表达载体pCXSN中,并通过叶盘转化法将其转入烟草中。
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