斜刺对急性钝挫伤模型兔腓肠肌IGF-1表达的影响

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目的:本实验通过观察斜刺和环孢素A (CsA)对骨骼肌急性钝挫伤模型兔行为学、血清标志酶、组织形态学和局部胰岛素样生长因子-1(IGF-1)mRNA及其蛋白表达的影响,探讨斜刺阿是穴促进骨骼肌挫伤后修复的作用机制。方法:30只新西兰大白兔随机分为5组:空白组、模型组、环孢素A (CsA)组、针刺组、针刺合并CsA组,每组6只。采用“重物自由落体打击法”,通过连续20次撞击造成兔急骨骼肌钝挫伤模型。针刺组采用阿是穴斜刺干预,CsA组腹腔注射CsA(9.25mg/kg-d)、针刺合并CsA组采用针刺联合CsA注射干预,模型组不干预。分别于造模前、造模后24h、造模后48h、造模后72h测量腓肠肌周长及肌硬度;各组兔于造模后72h进行腓肠肌损伤部位取材,做腓肠肌病理,光镜和透射电镜观察兔腓肠肌形态学改变;检测血清中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶含量(LDH)含量;并通过用Real-time PCR、Western blot方法检测各组损伤局部IGF-1mRNA及其蛋白表达量。结果:1.行为学观测显示:(1)体重:在同一时间窗下(造模前,造模后24h,造模后72h),各组兔体重无统计学差异(P>0.05);同一组别兔在不同时间窗下体重无统计学差异(P>0.05)。(2)腓肠肌周长:在同一时间窗-下(造模前,造模后24h,造模后48h,造模后72h),与空白组比较,模型组及各干预组周长显著增长,有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,各干预组周长有减小趋势,但无统计学意义(P>0.05);各干预组间相比周长变化无统计学差异(P>0.05)(3)腓肠肌硬度:造模前,各组兔均无统计学意义(P>0.05)。造模后24h(针刺即刻)与造模后48h(针刺后24h)变化趋势一致,与空白组比较,模型组及各干预组腓肠肌硬度显著增加,有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,各干预组腓肠肌硬度有减小趋势,但无统计学意义(P>0.05);各干预组间相比,腓肠肌硬度变化无统计学差异(P>0.05)。造模后72h(针刺后48h),与空白组比较,模型组、CsA组、针刺合并CsA组腓肠肌硬度显著增加(P<0.05);与模型组比较,干预各组腓肠肌硬度有增加趋势,均未见统计学差异(P>0.05);三个干预组比较,针刺合并CsA组较针刺组腓肠肌硬度增加(P<0.05)。2.造模后72h血清CK、LDH含量显示:(1)血清CK:与空白组比较,模型组、CsA组,针刺合并CsA组血清CK显著升高(P<0.05);与模型组比较,干预各组无统计学差异(P>0.05);各干预组间均无统计学(P>0.05)。(2)血清LDH:与空白组比较,模型组及干预各组无统计学差异(P>0.05):与模型组比较,各干预组无统计学差异(P>0.05);三个干预组比较,CsA组较针刺组血清LDH显著上升(P<0.05),其他干预组间无统计学差异。3.腓肠肌病理变化:从光镜结果看,空白组可见:肌纤维横切面呈多边形,大小均等;肌纤维纵切面见肌细胞呈长条状,相互平行排列。模型组可见:模型组肌纤维横切面呈不规整多边形,部分肌纤维水肿,有大量炎性细胞浸润,且以弥散性炎性细胞增多为主。与模型组相比,针刺组可见:肌纤维横切面呈不规整多边形,大小较均等,排列较整齐,局部炎性细胞浸润更明显,炎症反应集中于肌纤维损伤处且表现为从外向里渗透。CsA组可见:肌纤维横切面呈不规整多边形,大小不均等,肌纤维肿胀程度较模型组减轻,部分肌纤维断裂,损伤处炎性细胞浸润较模型组减弱。针刺合并CsA组可见:肌纤维横切面呈不规整多边形,大小较均等,可见肌纤维肿胀明显,肌细胞间隙明显减小,炎性细胞浸润。从透射电镜结果看,空白组可见:肌节、肌丝排列整齐,肌节完整,肌原纤维中Z线、M线清晰、连续。模型组部分肌纤维紊乱,无法区分A、I带,Z线、M线模糊。针刺组肌原纤维形态大致正常,肌丝总体排列整齐,肌节未见肿胀,Z线、M线清晰,部分略有位移。CsA肌节大小不一,肌丝紊乱,部分肌原纤维断裂,Z线、M线断裂、移位。针刺合并CsA组肌节大小不一,部分肌原纤维扭曲、断裂,部分Z线、M线断裂。4IGF一1mRNA及其蛋白表达结果显示:与空白组相比,各组IGF-1mRNA及蛋白表达均明显降低(P<0.05);与模型组相比,CsA组IGF-1mRNA表达升高(P>0.05), IGF-1蛋白表达下降(P>0.05),针刺组IGF-1mRNA与蛋白表达显著升高(P<0.05);三个干预组相比,针刺组和针刺合并CsA组较CsA组IGF-1mRNA及其蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:1.本实验中的造模方法可以成功复制骨骼肌急性闭合性钝挫伤模型。2.针刺、CsA、针刺合并CsA干预均对骨骼肌结构恢复有一定的促进作用。3.CsA干预可能通过抑制损伤局部骨骼肌炎性反应,一定程度延缓了针刺的修复作用;针刺合并CsA较单纯CsA干预效果更优。4.斜刺阿是穴可有效地促进腓肠肌急性钝挫伤修复,斜刺阿是穴对于骨骼肌损伤是高效的治疗方法,有效促进损伤局部骨骼肌结构和功能恢复,并对局部的炎性反应产生了良性的诱导,其治疗机理可能与上调IGF-1基因和蛋白表达,进而开放相关修复通路有关
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