产ε-聚赖氨酸链霉菌的诱变选育及发酵工艺研究

来源 :北京化工大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:jlq520
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一直以来,ε-聚赖氨酸(ε-PL)都是通过微生物生产发酵的途径获得,是一种具有显著抑菌活性,安全无毒并且水溶性和热稳定都非常好的新型生物防腐剂。本课题通过对白色链霉菌UD20进行诱变得到高产菌种UN9后,主要对白色链霉菌UN9的发酵工艺进行改进研究。本课题的主要成果如下:(1)通过对白色链霉菌UD20经过AEC抗性筛选,NTG诱变,紫外氯化锂诱变以及亚硝酸诱变处理,结合亚甲基蓝筛选最终得到一株产量为0.619 g.L-1命名为白色链霉菌UN9的高产菌,较出发菌UD20的产量0.368 g.L-1提高了 68.2%,并且菌UN9可以稳定遗传。(2)探究了外源赖氨酸对白色链霉菌UN9生物合成ε-PL的影响,确定了外源赖氨酸的添加量为2.0 g.L-1时对菌UN9的产量提高最显著,从不添加赖氨酸的0.610 g.L-1提高到了 0.721 g.L-1,产量提高了18.2%。(3)白色链霉菌UN9的以葡萄糖为碳源的5 L发酵罐自然发酵实验,菌UN9的产量达到了 1.802 g.L-1,是摇瓶发酵的2.499倍。然后通过对碳源的补料操作,使得产量再次大幅度提高到6.908 g.L-1,是自然分批发酵的3.834倍。针对发酵后期白色链霉菌UN9活性降低,菌体大量死亡的问题,提出了对菌UN9发酵后期流加酵母粉的方法,提高了白色链霉菌UN9后期代谢及生长能力,生物量提高到了 44.46 g·L-1,产量也进一步提高到9.216 g·L-1。(4)确定了甘油是除了葡萄糖外,白色链霉菌UN9合适的发酵碳源,探究了白色链霉菌UN9的双碳源发酵思路,最终葡萄糖和甘油的最适比例为20:30的发酵工艺比单一葡萄糖为碳源提高了 31.7%,比单一甘油作为碳源提高了 13.3%,达到0.815 g·L-1。(5)pH值是影响白色链霉菌UN9代谢的重要因素,考察了菌UN9在不同pH值(3.8和4.0)下的葡萄糖-甘油双碳源发酵,双碳源发酵的菌UN9在发酵体系pH 3.8和4.0的产量分别达到11.657 g·L-1和11.637 g·L-1。为了提高白色链霉菌菌UN9全程的产物合成速率,建立了两阶段pH值控制手段(24-72 h,pH值控制在3.8,72 h之后pH值控制在4.0),使得白色链霉菌UN9的产量进一步提高到了 13.893 g·L-1
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